Growth of Arabidopsis thaliana Plants and Preparation of Flowers for Pollen Hydration Assay

Начните с стратификации семян A.thaliana в стерильной воде Milli-Q в течение трех дней при четырех градусах Цельсия. Перенесите стратифицированные семена в компостные горшки, пипеткой стратифицированные семена. Поместите горшки в камеру для выращивания с контролируемой средой примерно на шесть недель, пока соцветия не укоренятся.

Чтобы обеспечить синхронное цветение, посейте растения-доноры и реципиенты пыльцы, а также любые другие подходящие контрольные линии растений вместе. За день до биоанализа выберите эти цветочные почки 12-й стадии от растения-реципиента, имея нераскрывшиеся цветочные почки, которые покажут раскрытие цветка и расхождение пыльника на следующий день. Затем поместите предметное стекло под стереопрепарирующий микроскоп.

Приклейте область стебля рядом с выбранным цветком-реципиентом на это предметное стекло. С помощью щипцов с тонкими наконечниками осторожно раздразните цветочный бутон и удалите все лепестки и пыльники цветка. После этого убедитесь, что пестик не поврежден, а рыльце не загрязняет пыльцу.