Фибринолитическая активность фибринолитического фермента, очищенного из Sipunculus nudus

Начните приготовление фибриновой пластины, смешав 25 миллиграммов фибриногена с 1,25 миллилитрами физиологического раствора. Далее приготовьте раствор тромбина, тщательно смешав 100 единиц тромбина с 1,05 миллилитрами физиологического раствора. Затем приготовьте раствор агарозы, добавив 0,5 грамма агарозы на 22,5 миллилитра 0,02 моляра буфера трис-гидрохлоридной кислоты.

Нагрейте раствор агарозы до 100 градусов Цельсия до полного растворения. Охладите раствор агарозы примерно до 50 градусов Цельсия, прежде чем добавлять в него раствор фибриногена. Сразу же добавьте раствор тромбина, быстро перемешайте и перелейте смесь в 60-миллиметровую посуду для культуры.

Чтобы загрузить образец, пробейте трехмиллиметровые лунки в фибриновых пластинах с помощью стерильного бура и заполните их 10 микролитрами образцов. Инкубируйте планшеты при температуре 37 градусов Цельсия в течение 18 часов, прежде чем измерять размер их зон деградации и рассчитывать фибринолитическую активность. Оценка фибринолитической активности показала 1,3-сантиметровую зону лизиса в контроле урокиназы, отсутствие зоны лизинга в физиологическом буфере, 2,1 сантиметра зоны лизинга в лунке сырого белка и 1,8 сантиметра диаметра зоны лизинга в лунке очищенного фибринолитического фермента.