Начните с вырезания нужного состаренного саженца кукурузы по мезокотильной ткани с помощью небольшого ножа или ножниц. Очистите рассаду с помощью кисточки. Затем держите инструмент для зачистки проводов челюстями лицом к желобу.
Поместите желоб в выбранное отверстие и сожмите ручки съемника вместе. Сдвиньте стриппер в сторону от желоба, чтобы обрезать верхнюю часть листьев. С помощью линейки измерьте длину от кончика зачатка до основания желоба.
Чтобы начать визуализацию зачатков листьев, удерживайте желоб на гладкой поверхности под стереомикроскопом с увеличением около 0,8x. С помощью лезвия бритвы или скальпеля сделайте первоначальный надрез немного выше целевой области, чтобы отбросить дистальную часть желоба. Затем получите тонкие срезы толщиной от 0,25 до 0,8 миллиметра в нужных точках по длине зачатка.
Как только это будет сделано, установите листовую секцию на чистое стеклянное предметное стекло. Нанесите несколько капель воды непосредственно на секцию с помощью пипетки. И положите сверху крышку.
При необходимости нанесите еще несколько капель через края покровного стекла. Поместите предметное стекло на предметный столик эпифлуоресцентного микроскопа и отрегулируйте настройки для визуализации флуорофора. С помощью этого метода был стандартизирован случайный забор резекции путем измерения зачатков до разреза.
Была обнаружена тенденция, показывающая, что исчезающая кисточка номер два имела более широкие зачатки и больше жилок, чем обычно, что указывает на то, что дефект у мутанта начался на ранних этапах развития листа. Этот метод также позволил систематически исследовать паттерны экспрессии репортеров флуоресцентного белка в зачатках листьев.
