Клеточное культивирование и медикаментозное лечение в клеточной линии эмбриональной почки человека 293 (HEK293)

Чтобы начать культивирование клеток, приготовьте питательную среду DMEM и растворы, необходимые для культивирования клеток. Засейте 1 x 10 в 6-ю ячейку HEK293 в 60-миллиметровый планшет или 6-луночный планшет в зависимости от условий обработки плюс контроль. На следующий день обработайте клетки ДНК-белковыми сшивками, или ДПК, индукторами по выбору.

Чтобы индуцировать ДПК, их убиквитилирование и СУМОилирование, собирают клетки через 20, 60 и 180 минут, или два часа в случае неферментативных ДПК. Чтобы индуцировать парилирование TOP1-DPC, предварительно обрабатывайте клетки 10 микролярной поли-АДФ-рибозной гликогидролазой или ингибитором PARG PDD00017273 в течение одного часа перед совместной обработкой 20 микромолярным камптотецином в течение 20, 60 и 180 минут.