Для начала положите на операционный стол мышь C57 black 6 в возрасте от 8 до 10 недель, находящуюся под наркозом. С помощью тупых щипцов вытащите язык и придерживайте его. Вставьте ларингоскоп в рот и визуализируйте голосовые связки.
Вставьте направляющую проволоку в катетер для внутривенного введения 20 калибра. Затем аккуратно протолкните катетер в трахею до тех пор, пока ее крыльевая часть не окажется на одном уровне с кончиком носа. Подключите мышь к аппарату ИВЛ и поместите ее в лежачее положение под тепловую лампу.
Поддерживайте ректальную температуру на уровне 37 градусов по Цельсию. После бритья и дезинфекции операционной области сделайте разрез кожи в один сантиметр в левой и правой паховой областях для доступа к бедренным артериям. Затем продезинфицируйте и перевяжите дистальный отдел бедренной артерии, а также нанесите одну каплю лидокаина.
Поместите зажим на проксимальную бедренную артерию и сделайте небольшой надрез на артерии дистальнее зажима. Вставьте катетер из полиэтилена 10 как в левую, так и в правую бедренную артерию. Введите от 50 микролитров одного до 10 гепаринизированного физиологического раствора в каждую артериальную линию.
Чтобы предотвратить свертывание крови, поверните мышь в положение лежа и установите ее на стереотаксическую раму головки. Подсоедините три игольчатых электрода к левой руке, левой ноге и правой руке для мониторинга электрокардиограммы. Затем побрейте макушку головы и простерилизуйте ее тремя чередующимися тампонами с йодом и спиртом.
Сделайте разрез кожи по средней линии размером 2,5 сантиметра и используйте четыре небольших ретрактора, чтобы обнажить всю поверхность черепа для визуализации мозга. Затем поместите над головой лазерный сканер с контрастным контрастом. Отрегулируйте лазерный спекл-имиджор, чтобы увидеть базовую линию кровеносных сосудов головного мозга до остановки сердца.
Перед тем, как вызвать остановку сердца, наполните пластиковый шприц объемом один миллилитр 26 микролитрами раствора для реанимационного коктейля. Как только температура тела достигнет 37 градусов по Цельсию, настройте кислородметр на 100%, чтобы насытить кровь кислородом в течение двух минут. Затем наберите до 200 микролитров крови через правую бедренную артерию в пластиковый шприц, в котором находится реанимационный коктейль.
Чтобы вызвать остановку сердца, выключите кислород и увеличьте содержание азота до 100%, чтобы вызвать аноксию. Выключите аппарат искусственной вентиляции легких, испаритель изофлурана, регулятор температуры и расходомер азота. Подтвердить отсутствие мозгового кровотока при остановке сердца.
Наблюдая за лазерным спекл-изображением, отрегулируйте уровень кислорода до 100% и включите аппарат искусственной вентиляции легких через восемь минут после начала остановки сердца. Немедленно введите изъятую насыщенную кислородом кровь, смешанную с реанимационным коктейлем, в кровообращение через правую бедренную артерию в течение одной минуты для восстановления жизненно важных показателей, таких как частота сердечных сокращений и артериальное давление. Посмотрите лазерное спекл-изображение, чтобы подтвердить успешную реперфузию головного мозга.
Для послеоперационного восстановления удалите ретракторы с головы, нанесите 0,25% бупивакаина на разрез кожи и закройте разрез с помощью нейлоновой нити 6-0. Затем нанесите мазь с антибиотиком на закрытую поверхность разреза кожи. Индукция остановки сердца у мыши привела к тяжелой брадикардии в течение 45 секунд.
После двух минут аноксии частота сердечных сокращений значительно снизилась. Артериальное давление упало ниже 20 миллиметров ртутного столба, а мозговой кровоток прекратился. Кроме того, температура тела медленно снижалась примерно до 32 градусов по Цельсию в конце остановки сердца.
После введения реанимационной смеси крови все жизненные функции начали восстанавливаться. Лазерная спекл-контрастная визуализация подтвердила полное отсутствие кровотока в мозге во время остановки сердца, фотоакустические изображения позволили идентифицировать изменения кровотока, структуры и оксигенации во время процедуры остановки сердца.
