Для начала проинструктируйте пациента о необходимости поститься в течение ночи перед сбором образцов. На следующий день откройте набор для тестирования строки. Возьмите капсулу и зажмите петлю на конце веревочки.
Прикрепите веревку к щеке пациента. Затем помогите пациенту положить капсулу на язык ближе к задней стенке горла и проглотить ее, запивая глотком воды. После того, как капсула растворится в желудке пациента в течение часа, проинструктируйте обученного помощника аккуратно вытащить веревку из пациента.
Затем поместите конец, смоченный в желудочной жидкости, в раствор для консервации образцов TSE и отрежьте нижний конец нити. Поместите промаркированный образец с пробирками для сбора на штатив для пробирок и заверните его на 10 секунд. Переверните пластину на 32 лунки вверх дном несколько раз, чтобы снова подвесить магнитные шарики, сделайте вихрь на 10 секунд.
Затем аккуратно снимите потолок из алюминиевой фольги с плиты. Перенесите 200 микролитров желудочной жидкости из каждого образца и ДНК хеликобактер пилори в качестве положительного контроля в отдельные лунки. Поместите планшет с 32 лунками в соответствующую ячейку для образцов машины для извлечения нуклеиновых кислот для автоматической экстракции ДНК после извлечения и подтверждения ДНК.
Поместите избыток желудочной жидкости и извлеченных образцов ДНК при температуре минус 20 градусов Цельсия до использования, разморозьте реакционную смесь qPCR на льду и перемешайте ее путем перелистывания и вращения, чтобы избежать потери реагента Для каждого образца в 32-луночной пластине смешайте 20 микролитров реакционной смеси ПЦР с прямыми и обратными праймерами мочевины, зонд мочевины и пять микролитров извлеченной ДНК. Поместите планшет на машину для количественной ПЦР и установите программу термоамплификатора. Установите сбор флуоресцентного сигнала на FAM сбора данных, на период продления амплификации и начните прогон, по завершении реакции.
Сохраните данные для анализа. Анализируйте данные с помощью специализированного программного обеспечения для количественной ПЦР, поскольку прибор автоматически выбирает базовые пороговые значения. Если результаты теста за ч.
pylori положительные: замените набор реагентов на реагенты для обнаружения мутации гена 23S рРНК и гена gyrA в наборе H. pylori и начните тестирование лекарственной устойчивости образца. Данное исследование показывает обнаружение h.
пилори и ее устойчивость к антибиотикам в желудочной жидкости с помощью количественной ПЦР. Среди H. pylori положительные пробы.
S2 имел значения КТ в пределах диапазона обнаружения, что указывало на двойную резистентность к кларитромицину и левофлоксацину. Значения S3 CT находились в пределах обнаружения инфекции H. pylori и резистентности к левофлоксацину, но не к резистентности к кларитромицину, что указывает на резистентность к левофлоксацину.
Аналогичным образом, S4 имел обнаруживаемые значения КТ для инфекции H. pylori и резистентности к кларитромицину, но не для резистентности к левофлоксацину, что предполагает резистентность к кларитромицину. S5 имел обнаруживаемые значения CT только для h.
Инфекция Pylori, указывающая на чувствительность к обоим антибиотикам и позволяющая лечиться любым из этих препаратов.
