Начните с переноса животного под наркозом в стереотаксическую рамку, а затем закрепите голову в носовом конусе и ушных планках. Разместите щупы для измерения пульса, пульсационного насыщения кислородом, артериального давления, температуры животного. Нанесите глазную мазь.
Удалите волосы с помощью крема для депиляции и асептически очистите кожу головы тремя пассажами йода и спирта. Для терминального исследования удалите скальп хирургическими ножницами и обнажите череп примерно на трех миллиметрах от ламбоидного шва каудально и на трех миллиметрах фронтально до брегмы. Иссекайте кожу головы частично, чтобы обнажить внутреннюю часть височной мышцы с обеих сторон.
Затем удалите остатки подкожной соединительной ткани, чтобы череп был чистым и сухим, чтобы применить стимулирующие электроды. Далее нанесите проводящий гель на ту сторону электродов, которая будет соприкасаться с черепом. Поместите электрод на эту височную мышцу и закрепите ее хирургическим суперклеем по краю в прерывистых местах.
Затем нанесите пасту с лидокаином на височную мышцу и кожу головы с обеих сторон, не нарушая электроды. Проверьте импеданс экстракраниальных стимулирующих электродов. Затем поместите мышь под лазерное устройство для визуализации спеклов без внутричерепных записывающих электродов.
Чтобы применить стимуляцию между двумя tACS-электродами черепа, используйте коммерческое совместимое с человеком стимулирующее устройство, которое подает постоянный ток. Перед стимуляцией получите четкую базовую линию. Применяйте короткие периоды стимуляции включения/выключения с различной амплитудой с обеих сторон черепа.
Обеспечьте четкую исходную линию после стимуляции. После того, как экстракраниальные стимулирующие электроды размещены на четыре миллиметра латерально с каждой стороны черепа, отметьте положение заусенцев на расстоянии двух миллиметров с каждой стороны от средней линии, на расстоянии четырех миллиметров друг от друга, и ортогонально сагиттальному шву. Затем просверлите два отверстия для заусенцев для стеклянных электродов.
Заполните эти отверстия для заусенцев стерильным минеральным маслом, чтобы предотвратить попадание тока в череп от экстракраниальных электродов. Затем заполните микроэлектроды из объединенного стекла 0,2 моляра хлорида натрия и поместите их с помощью микроманипулятора в два отверстия для заусенцев, расположенные сбоку от сагиттального шва. Поместите стеклянные микроэлектроды в отверстия для заусенцев.
Затем проверьте импеданс экстракраниальных стимулирующих электродов после установки отверстия для заусенцев, чтобы убедиться, что они не мешают потоку тока в мозг. Чтобы измерить мозговой кровоток в результате экстракраниальной стимуляции, поместите мышь под лазерное устройство для визуализации спеклов с внутричерепными записывающими электродами. После введения в мозг выполните профили глубины на различной симметричной глубине, чтобы убедиться, что эти стеклянные микроэлектроды находятся примерно в одном миллиметре в коре головного мозга.
Используйте систему оцифровки для непрерывной записи данных с доплеровских щупов и микроэлектродов в течение достаточно стабильного базового времени. Затем примените стимуляцию включения/выключения и протестируйте дополнительную стимуляцию черепа. Для экспериментов по вызову расширяющейся депрессии добавьте третье отверстие для заусенцев на правой стороне черепа, на 1,5 миллиметра рострально к корональному шву и на один миллиметр латерально к заднему лобному шву.
Заполните это отверстие для заусенцев KCL для последующего нанесения. В ответ на tACS низкой интенсивности были получены данные для внутричерепной прямой электрической записи постоянного тока и двусторонней лазерной допплеровской регистрации мозгового кровотока. Небольшая реакция наблюдалась в ответ на стимул 0,75 миллиампера, в то время как большая реакция наблюдалась в ответ на стимул в 1 миллиампер.
Как для электрических, так и для мозговых следов кровотока ответы были асимметричными между правой и левой стороной черепа. Лазерная визуализация мозгового кровотока во время приступов показала увеличение кровотока в ответ на стимуляцию, который равномерно распределялся по всей коре головного мозга. После стимуляции кровоток возвращался к исходному уровню.
