Блокирование аутофлуоресценции и извлечение антигена в образцах тканей

Для начала приготовьте 10-кратно концентрированный цитрат, целевой раствор для извлечения или TRS с pH шесть, в соответствии с инструкциями производителя. Разведите его в соотношении 1:10 с деионизированной водой. Затем нагрейте раствор в пластиковой баночке для окрашивания до 96 градусов Цельсия.

Снимите слайды с решетки для слайдов и поместите их во влажную камеру. Затем пипеткой нанесите одну или две капли автофлуоресцентного восстановителя на каждый образец ткани и инкубируйте образцы в течение пяти минут. Сложите слайды обратно в решетку для слайдов и промойте в течение одной минуты в 60% этаноле движениями вверх и вниз, чтобы удалить неиспользованный реагент, снижающий автофлуоресценцию.

Погрузите решетку в деионизированную воду на пять минут. Переложите предметные стекла в баночку для окрашивания с предварительно нагретым буфером TRS для извлечения антигена. Выдержите предметные стекла в течение 10 минут при температуре 96 градусов Цельсия на водяной бане.

Снимите банку с окрашиванием и дайте ей остыть до комнатной температуры в течение примерно 60-90 минут. Далее снимите TRS, сохраняя горки в банке. Дважды промойте предметные стекла буферным физиологическим раствором TRIS, содержащим 0,05% Tween при pH 7,4, в течение трех минут каждое, чтобы удалить остатки TRS.

Поместите предметные стекла во влажную камеру. Аккуратно сотрите лишнюю воду со предметных стекол бумажными салфетками, затем обведите каждый образец с помощью гидрофобной барьерной ручки, чтобы предотвратить растекание раствора антитела.