Для начала откройте программное приложение, дважды щелкнув по значку исполняемого файла. Введите последовательности тяжелой и легкой цепи в текстовые поля под столбцом 1 без пробелов. Для биспецифических антител добавьте дополнительные тяжелые или легкие цепи во втором наборе текстовых полей под столбцом 2.
Оставьте эти коробки пустыми для моноклональных антител с идентичными тяжелыми цепями и легкими цепями. Установите флажки циклизации концевой клеммы и зажима клеммы C, если применимы эти варианты клемм тяжелой цепи. Добавляйте химические модификации, включая линкер и полезную нагрузку для конъюгатов антител, в коробки для химической модификации с тяжелой и легкой цепью, используя элементарные композиции, такие как хлорид кальция.
Эти модификации будут добавлены к соответствующей белковой субъединице или цепи. Укажите количество дисульфидных связей в молекулах белка в текстовом поле, помеченном как общее количество дисульфидов. Введите количество невосстановленных дисульфидных связей тяжелой цепи в текстовое поле Невосстановленные дисульфиды тяжелой цепи и количество невосстановленных дисульфидных связей легкой цепи в текстовое поле Невосстановленные дисульфиды легкой цепи в зависимости от степени восстановления.
Если гликозилирование присутствует в легкой цепи моноклональных антител, установите флажок «Легкая цепь гликозилирована». Нажмите кнопку «Обзор», чтобы выбрать выходную папку для текстового поля выходной папки, и введите имя выходного файла без расширения в текстовое поле «Файл Excel без расширения». Затем нажмите на кнопку «Отправить».
На экране появится сообщение о создании отчета о массовых расчетах, а выходной файл можно будет найти в папке, указанной пользователем. Приложение закроется автоматически. В данной таблице сведены химические составы, расчетные массы, измеренные массы и погрешности массы различных моноклональных антител.
Коммерчески доступный стандарт моноклонального антитела был выбран для представления обычного моноклонального антитела с идентичными тяжелыми цепями, идентичными легкими цепями и одним N-связанным сайтом гликозилирования в области FC. Для расширения сферы применения также были выбраны моноклональное антитело с дополнительной N-связанной гликозилацией легкой цепи, биспецифическое моноклональное антитело и конъюгированное моноклональное антитело с лекарственным средством-антителом. Малые погрешности масс между рассчитанными и измеренными массами находились в пределах нормальных критериев допустимой погрешности массы, что позволяет предположить, что рассчитанные массы были точными.
