Чтобы начать процедуру в правильно оборудованной операционной, поместите обезболенную свинью в положение лежачего за грудиной и убедитесь, что все подключенные катеты и трубки надежно закреплены. Удалите остатки волос с выбритого участка, предназначенного для нанесения ран, с помощью крема для эпиляции. После стерилизации мест раны отметьте область с помощью стерильного шаблона для ожогов и хирургического маркера для кожи.
Установите конфорку, отрегулировав установку на блоке управления на 150 градусов Цельсия. Нижняя установочная точка равна 145 градусам Цельсия и верхняя заданная точка равна 155 градусам Цельсия. Используя нагретые блоки из нержавеющей стали, подключенные к устройству для сжигания, создайте ожоговую рану на всю толщину, поместив блоки на кожу на 60 секунд.
Сделайте цифровую фотографию всей спины свиньи, включая табличку с указанием времени и даты идентификации свиньи. Затем отдельно сделайте снимки для каждой раны вместе с линейкой и табличкой, на которой будет указан идентификатор свиньи, идентификатор раны и временная точка. Чтобы оценить микрососудистую перфузию раны в режиме реального времени с помощью лазерной спекл-томографии или БИС, визуализируйте все раны в одной записи с помощью сканера перфузии крови LASCA.
Чтобы измерить трансэпидермальную потерю воды или TEWL, наденьте чистую крышку зонда на наконечник зонда TEWL, который будет соприкасаться с тканью раны. Измерьте каждую рану пять раз, сначала в центре, а затем в каждом углу. Затем экспортируйте все показания в электронную таблицу.
Проведите гармоническое ультразвуковое исследование или HUSD-картирование, сканируя рану ультразвуковым зондом от средней линии или позвоночного столба, начиная с нормальной кожи и двигаясь к боковой стороне свиньи над ранами до тех пор, пока снова не будет достигнута нормальная кожа. Следуйте шаблону сканирования для каждой раны как в режиме B, так и в режиме эластографии тканей. Изменяйте аннотацию после того, как каждая рана отображается в режиме B и в режиме elasto, то есть две записи на рану.
После того, как все снимки будут завершены, закройте ожоговые раны по отдельности прозрачными пленочными повязками или тестовой повязкой. Затем наложите более крупную прозрачную пленочную повязку на всю область раны. Наложите второй слой рулонной марли свободно вокруг всего туловища свиньи, чтобы впитать любую жидкость, выделяющуюся из ран.
Накройте марлю неплотно слоем гибкого эластичного бинта. Накройте эластичный бинт последним слоем четырехдюймовой эластичной ленты. После прекращения приема обезболивающего газа по завершении перевязки дайте свинье оставаться на кислороде не менее пяти минут.
Чтобы сделать инокуляцию ожоговой раны на третий день после ожога, распылите инокулятию по поверхности открытых ран с помощью пипетки и равномерно распределите его с помощью одноразового разбрасывателя. Чтобы собрать биопсию ткани для анализа после визуализации, инфильтрируйте область вокруг раны 0,5% бупивакаином. С помощью одноразового скальпеля с лезвием размера 10 отрежьте полосу шириной 3-4 миллиметра от одного края раны до другого, сохраняя небольшие края нормальной кожи с обеих сторон.
Вырежьте 6-миллиметровую пробивную биопсию из раны либо с раневого ложа, либо с края раны. Добиться гемостаза после того, как образцы будут собраны, можно аккуратно прижать рану стерильной марлей. Накройте рану неадгезивной повязкой и перевяжите ее, как показано ранее.
Анализ биопсии методом окрашивания гематоксилином и эозином показал искажение и некроз всех гистологических слоев кожи. Созданная биопленка была дополнительно валидирована на седьмой день после инокуляции колониеобразующей единицей. Сканирование с помощью электронной микроскопии, визуализации и иммунофлуоресцентного окрашивания.
Ожоговые раны показали толстую биогенную мембрану на поверхности раны на седьмой день после инокуляции, что подтверждает инфекцию и образование биопленки. Площадь раны начала уменьшаться к 14-му дню, но к 56-му дню наблюдалось неполное заживление примерно до 25% от первоначального размера раны, что указывает на хронизацию раны. Хронизация раны и нарушение заживления ран были дополнительно подтверждены с помощью TEWL, показывающего высокую трансэпидермальную потерю воды во все измеренные моменты времени.
Это также подтверждалось подавлением плотных соединительных белков ZO-1 и 2 и нарушением восстановления барьерной функции кожи.
