Разделение тканей кораллового хозяина и клеток Symbiodiniaceae для экстракции метаболитов

Гомогенизируйте образец коралла с помощью механического пилообразного гомогенизатора в течение одной минуты, пока образец не будет полностью гомогенизирован и не будут видны комки. Для нормализации соберите аликвоту объемом в один миллилитр из гомогенизированной ткани для подсчета клеток Symbiodiniaceae, анализа содержания белка в коралловой ткани и оценки хлорофилла-А. При разделении материала хозяина и клеток водорослей центрифугируйте оставшийся гомогенат кораллов при температуре 2500 G в течение пяти минут при четырех градусах Цельсия.

Перенесите надосадочную жидкость, содержащую материал хозяина, в новую 15-миллилитровую трубку. Добавьте два миллилитра холодной, сверхчистой воды к водорослевым гранулам и завихрите материал хозяина и водорослевую гранулу на две минуты для повторного взросления. Снова центрифугируйте все образцы и перенесите надосадочную жидкость, содержащую материал хозяина, в новую 15-миллилитровую пробирку.

После удаления надосадочной жидкости из водорослевой гранулы сохраните гранулу в исходной 15-миллилитровой пробирке. Обвейте гомогенат голобионта или отделенного хозяина во фракциях Symbiodiniaceae при температуре минус 80 градусов Цельсия в течение не менее двух часов. Затем лиофилизируйте образцы в течение ночи с помощью вакуума 0,01 миллибар при температуре минус 85 градусов Цельсия.

После сушки взвесьте каждый образец на лабораторных весах в отдельные двухмиллилитровые микроцентрифужные пробирки без пластификаторов. Микроскопическая визуализация не выявила клеток Symbiodiniaceae в образцах тканей хозяина после трех этапов промывки. Аналогичным образом, минимальное количество ткани хозяина было обнаружено во фракциях симбионтов.

Тем не менее, гомогенат голобионта показал, что внутриклеточные Symbiodiniaceae не были высвобождены из своих симбиосом путем простой аэрографии.