Для начала поместите акцизные кусочки плацентарных образцов в PBS. Удалите хорионическую пластинку, материнскую децидуа и любые видимые инфаркты из образца. Рассеките оставшийся образец ткани на ворсинчатые экспланты с диаметром поперечного сечения около 0,5 сантиметра.
Переложите экспланты в чашку Петри, наполненную свежими PBS. С помощью щипцов встряхните каждый эксплант в PBS, чтобы удалить всю кровь. Под стерильным колпаком используйте люэровские замки для подключения пяти камер к бутылочке-резервуару.
Переверните камеры вверх дном и снимите дно. Теперь с помощью щипцов поместите металлические пластины по центру в верхних частях камер штифтами вверх. Заполните половину камер одним миллилитром предварительно подогретой питательной среды.
Добавьте в резервуар дополнительно 20 миллилитров среды. С помощью щипцов аккуратно поместите ворсинчатый эксплант на иглы металлической пластины в камере. Поместите четыре экспланта в одну камеру.
Снова прикрепите нижнюю часть камер, чтобы закрыть ее. Затем подсоедините трубку насоса к насосу, чтобы соединить проточный контур с перистальтическим насосом внутри биореактора. Исправьте это на четвертом этапе.
В меню «Насосы» выберите режим «Вручную». Отрегулируйте скорость насоса на один миллилитр в минуту и нажмите «Запустить», чтобы начать сцеживание. Во время наполнения держите камеры под углом, чтобы обеспечить полное заполнение.
Когда процесс наполнения будет завершен, снова переверните камеру. Убедитесь, что камеры надежно закреплены, и закройте обе крышки биореактора. После завершения инкубации тканей нажмите кнопку Abort, чтобы остановить помпу.
За один раз откройте две крышки биореактора и одну проточную камеру. С помощью щипцов осторожно извлеките экспланты из металлической пластины для дальнейшего анализа. Иммуногистохимически окрашенные экспланты показали хорошо структурированное и организованное визуальное представление цитоскелета в свежей и проточной культуральной ткани.
Со временем агрегация микрофиламентов все чаще наблюдалась в статических эксплантах, что означало деградацию структуры цитоскелета. Снижение целостности тканей во время культивирования было подтверждено констатацией гематоксилина и эозина. Свежие ткани показали плотную и плотно упакованную строму.
После 48 часов культивирования в потоке были видны частично отделившиеся фрагменты синцитиотрофобласта. Целостность тканей была неадекватно сохранена уже через 24 часа в статическом культуральном состоянии, которое еще больше ухудшилось через 48 часов. Окрашивание эндотелиальных клеток показало отчетливо организованные клетки в свежих тканях.
Морфологическая целостность сохранялась даже после 48 часов в проточных культурах. Однако статический эксплант показал частичное разрушение даже через 24 часа, которое еще больше ухудшилось через 48 часов.
