Подготовка клеток к сборке 3D-гематоэнцефалического барьера in vitro, полученного из стволовых клеток человека in vitro

Начните с подготовки дифференцированных эндотелиальных клеток, паразитов и астроцитов для сборки модели iBBB. После аспирации среды для культивирования клеток из дифференцированных эндотелиальных клеток промойте клетки PBS один раз, затем добавьте к промытым клеткам смесь протеазы коллагеназы и диссоциируйте клетки при температуре 37 градусов Цельсия в течение пяти минут. Перенесите смесь протеазы коллагеназы с диссоциированными клетками в коническую пробирку, содержащую hECSR, поддерживая соотношение смеси и hECSR 1:3, затем центрифугируйте клетки при 300 G в течение трех минут и аспирируйте надосадочную жидкость перед тем, как снова суспендировать полученную клеточную гранулу в hECSR.

Диссоциируйте дифференцированных паразитов смесью протеазы коллагеназы при температуре 37 градусов Цельсия в течение пяти минут. Добавьте соответствующее количество N2B27 в коническую пробирку и перенесите в нее диссоциированные клетки в смеси протеазы коллагеназы, поддерживая соотношение смеси к N2B27 1:3. Раскручивайте ячейки при 300 G в течение трех минут.

После аспирации надосадочной жидкости повторно суспендировать клеточную гранулу в N2B27. Диссоциировать дифференцированные астроциты смесью протеазы коллагеназы при температуре 37 градусов Цельсия в течение пяти минут. Перенесите диссоциированные клетки в смеси протеазы коллагеназы в коническую трубку, содержащую полную астроцитарную среду в соотношении смеси к среде 1:3.

После центрифугирования клеток при 300 G в течение трех минут аспирируют надосадочную жидкость и ресуспендируют клеточную гранулу в полной среде астроцитов. Теперь ячейки готовы к сборке iBBB.