Возрождение криоконсервированных предшественников фоторецепторов, полученных от Day 32 hESC

Начните с помещения PRDM на водяную баню, установленную при температуре 37 градусов по Цельсию. Удалите криовиал, содержащий фоторецепторные клетки-предшественники 32-го дня hESC, из жидкого азота и храните его на сухом льду. Затем разморозьте криовиал на водяной бане при температуре 37 градусов Цельсия в течение трех-пяти минут.

Повторно суспендируйте клетки в одном миллилитре PRDM. Центрифугируйте их при 130G в течение четырех минут После удаления надосадочной жидкости повторно суспендируйте гранулу в одном миллилитре PRDM. Чтобы подсчитать клетки, возьмите 10 микролитров клеточной суспензии и смешайте с 0,2%-ным трипановым синим, следуя инструкции производителя.

Нанесите смесь клеток в предметное стекло камеры для подсчета клеток и определите количество клеток и жизнеспособность с помощью автоматического счетчика клеток. Если жизнеспособность клеток превышает 70%, центрифугируйте оставшуюся клеточную суспензию при 130G в течение четырех минут. Удалите надосадочную жидкость и повторно суспендируйте клеточную гранулу в PRDM для трансплантации.

С помощью наконечника для пипетки объемом 10 микролитров повторно суспендируйте клеточные комки в микрофуге-пробирке до тех пор, пока они не исчезнут. Загрузите суспензию в инъекционный шприц 33 калибра и подтвердите экструзию клеточного раствора через иглу.