Для начала введите упреждающее обезболивающее средство в мышь, находящуюся под наркозом. С помощью машинок для стрижки побрейте голову мыши. Установите животное на стереотаксический стол и правильно расположите ушные планки.
Приложите рот мыши к части мыши и осторожно расположите язык снаружи, чтобы предотвратить удушье. После проверки глубины анестезии расположите опору для возвышения под животным, чтобы тело и голова оставались горизонтально выровненными. И используйте теплую прокладку с бумагой, чтобы поддерживать температуру животного.
Нанесите мазь на оба глаза, чтобы предотвратить сухость. Затем, используя йод и спирт, продезинфицируйте голову мыши. С помощью скальпеля сделайте разрез по средней линии головы, причем надрез тянется из-за глаз до наложения лямбда-шва.
Обнажите череп и промокните его стерильным ватным наконечником, смоченным в 0,9 растворе хлорида натрия. Под стереомикроскопом определите ростральную ринальную вену или RRV и с помощью стерильного карандаша отметьте ее. Используя стерильную иглу в качестве ориентира, подтвердите ориентацию мозга.
Убедитесь, что координаты DV и ML не изменяются. Затем поместите стерильную стеклянную пипетку, содержащую раствор вируса, в референс RRV для нулевого переднезаднего референса. Продвигайте пипетку по сагиттальному шву до достижения выбранной переднезадней координаты.
Отметьте это место стерильным карандашом и поднимите иглу. Осторожно просверлите небольшой круг вокруг отмеченного места, чтобы избежать перелома верхней сагиттальной пазухи, и удалите часть черепа с помощью небольших щипцов. Затем, используя верхнюю сагиттальную срединную синус в качестве медиолатерального референса, переместите пипетку в исходное положение и опускайте ее до тех пор, пока она не коснется твердой мозговой оболочки в качестве дорсовентрального референса.
Создайте небольшой разрыв в твердой мозговой оболочке и опустите пипетку в предпочтительное дорсовентральное положение. Введите в мозг указанное количество аденоассоциированных вирусов или векторов AAV и удалите пипетку. Освободите мышь от ушных ушей, затем закройте кожу с помощью хирургических зажимов.
Переведите животное в отдельную утепленную клетку для восстановления. Следите за восстановлением мыши. Как только он придет в сознание, верните его в исходное помещение, когда он полностью придет в себя.
