Генерация суспензии одиночных клеток селезенки мыши и окрашивание FACS для сортировки на основе проточной цитометрии

Для начала поместите ситечко с ячейками 70 микрон на 50-миллилитровую центрифужную пробирку и смочите ее PBS. После выделения селезенки от мыши, чтобы получить одноклеточную суспензию, пропустите селезенку через сетку, используя подставку большого пальца поршня шприца и 30 миллилитров холодного PBS. Центрифугируйте фильтрат при 300 G в течение пяти минут и удалите надосадочную жидкость.

Повторно суспендируйте гранулу в одном миллилитре буфера для лизиса аммония-хлоридно-калиевого и инкубируйте в течение двух минут при комнатной температуре. После лизиса добавьте в пробирку 50 миллилитров холодного PBS, затем центрифугу и выбросьте надосадочную жидкость, прежде чем повторно суспендировать гранулу в свежеприготовленном коктейле антител. Переложите клеточную суспензию в пятимиллилитровую пробирку FACS и инкубируйте в течение 30 минут при температуре четыре градуса Цельсия в темноте.

После инкубации добавьте три миллилитра холодного PBS в пробирку, затем центрифугу и выбросьте надосадочную жидкость, прежде чем повторно суспендировать гранулу в одном миллилитре холодного буфера для ресуспендирования FACS. Отфильтруйте ячейки через фильтрующую колпачок трубку FACS.