Диссекция и удаление височной кости для сбора слухового эпителия у новорожденных мышей

Для начала надежно удерживайте голову усыпленных новорожденных мышей на месте. С помощью микрооперационных ножниц раскройте кожу головы вдоль сагиттального шва. Затем отделите и иммобилизуйте кожу головы с обеих сторон пальцами.

С помощью ножниц разрежьте череп и переверните его вперед, чтобы получить доступ к черепу. Используйте небольшой надкостничный подъемник для извлечения мозга, а затем с помощью кончика ножниц аккуратно соскребите мозг, обнажив основание черепа. Теперь рассмотрим двусторонние височные кости у основания черепа.

С помощью ножниц разрежьте основание черепа по средней линии. Затем соскребите кожу и удалите все ненужные кости. Законсервируйте и перенесите височные кости в 35-миллиметровые стерильные чашки Петри, наполненные свежим HBSS.

Затем с помощью пары щипцов с 5 числовыми точками удалите болу и окружающие ткани из каменистой части височной кости. Удерживайте щипцы одной рукой, чтобы стабилизировать полукруглую часть височной кости. Другой рукой введите нижний кончик щипцов в круглую оконную нишу, отделив боковую кость улитки от чешуи преддверия.

Осторожно удалите каменистую часть височной кости, не соприкасаясь с эпителием корти. Затем тщательно отделите и извлеките костный лабиринт улитки, начиная от базального до апикального конца. С помощью 5 заостренных щипцов тщательно микроизолируйте сенсорный эпителий кортиального органа от модиолуса.

Затем используйте микрооперационные щипцы для удержания спиральной связки и аккуратно отделите ее от сосудистой полосы. Перенесите чистый слуховой эпителий с помощью пипетки объемом 200 микролитров в трехмиллиметровую стерильную чашку для культивирования, содержащую HBSS. Поместите изолированный слуховой эпителий в 100-миллиметровую стерильную чашку Петри, заполненную HBSS, для последующих этапов подготовки.