Введение bOpto-BMP/узловых конструкций эмбрионам рыбок данио

Для начала используйте инкубатор и светодиодный микропланшетный осветитель, чтобы создать световой короб для контроля освещенности и температуры. Затем установите шестилуночную пластину на верхнюю полку инкубатора и проверьте, равномерно ли ее охватывает световой луч. Используйте лист бумаги для визуализации распределения светового покрытия.

Используйте экспонометр для измерения интенсивности излучения и пространственной равномерности. Не менее чем за сутки до инъекций сделайте инъекционные посуды и покрытые агарозой шестилуночные планшеты. Промойте форму для инъекций средой для зародыша и аккуратно положите на линьку и агарозу.

Как только агароза застынет, аккуратно удалите плесень язычком. Затем подготовьте стеклянные пипетки для экспериментов по иммунофлуоресценции на дехлорированных эмбрионах. Поместите конец стеклянной пипетки в булочку и пламя горелки и непрерывно вращайте, пока края не станут гладкими.

Приготовьте смесь для инъекций с использованием показанных здесь мРНК. Для анализа фенотипирования введите иглу через корион непосредственно в центр клетки на одной клеточной стадии и введите один нанолитр инъекционной смеси. При проведении иммунофлуоресцентного анализа нацельтесь на центр клетки эмбрионов, покрытых оболочкой, на стадии одной клетки.

Для обоих анализов подготовьте достаточное количество эмбрионов для неинъекционных, неинъекционных, неинъекционных и инъецированных эмбрионов. Выберите не менее 30 эмбрионов для каждого состояния. Для иммунофлюоресцентного анализа приготовьте дополнительную чашку, содержащую неинъекционные эмбрионы в качестве прокси для оценки прогрессирования стадий развития.

После инъекции инкубируйте эмбрионы в чашках Петри при температуре 28 градусов Цельсия.