Для начала сделайте инокуляционную петлю, чтобы выбрать моноклональную колонию Candida albicans из планшета YPD. Перенесите колонию в пять миллилитров жидкой среды YPD, добавив 50 микрограмм на миллилитр карбенициллина. Встряхните ячейки с постоянной скоростью 220 об/мин при температуре 30 градусов Цельсия в течение ночи.
Затем центрифугируют клеточную суспензию при 400 г в течение пяти минут при комнатной температуре. После удаления надосадочной жидкости повторно суспендируйте клетки в обычном физиологическом растворе и отрегулируйте концентрацию клеток, сопоставив мутность клеточной суспензии со стандартом 0,5 по Мак-Фарланду. Чтобы создать 0,9% физиологического раствора, взвесьте 0,9 грамма хлорида натрия и растворите его в 100 миллилитрах деионизированной воды.
Затем перед использованием поместите хирургические инструменты в проволоку из титаноникелевого сплава при температуре 121 градус Цельсия в течение 30 минут. Затем случайным образом разделите 30 самцов мышей C57BL/6 на контрольную группу с пустым имплантатом и PJI. После обезболивания мышей удалите волосы с левой задней конечности и продезинфицируйте выбритый участок йодом.
Проверьте глубину анестезии, наблюдая за потерей рефлекса выпрямления. Мышам контрольной группы не проводили никакого лечения. Для мышей в группе пустого имплантата и PJI используйте лезвие под номером 10, чтобы создать пятимиллиметровый продольный разрез на колене левой задней конечности, чтобы обнажить суставы для дальнейших процедур.
Теперь введите стерильную иглу шприца, чтобы создать отверстие длиной пять миллиметров в бедренном интрамедуллярном канале. Осторожно вставьте проволоку из никелево-титанового сплава в отверстие, прежде чем разрезать ее ножницами. Затем по капле вводят два микролитра среды YPD вдоль проволоки из никель-титанового сплава мышам в группе пустых имплантатов.
Используя нейлоновый шов, закройте рану слой за слоем. Далее инокулируют два микролитра клеток Candida albicans в суставное пространство мышей по проволоке из никелево-титанового сплава в группе PJI. Используя нейлоновый шов, закройте рану слой за слоем.
Обеспечьте мышам свободный доступ к воде и пище в течение 14 дней.
