Микроинъекция дцРНК в куколки Trichogramma dendrolimi и мониторинг результатов развития

Для начала включите стеклянный игольчатый пуллер, затем установите нагрев на 280, скорость на 170, задержку на 250 и полюс на 30. Скосите кончик иглы капиллярного стекла. Затем с помощью микроинъекционного насоса загрузите примерно два микролитра двухцепочечного раствора РНК гомологии тяжелой цепи ферритина в иглу для инъекций.

Перенесите агаровую пластину, содержащую куколки Trichogramma dendrolimi, на предметный столик для составного микроскопа. Осторожно введите инъекционную иглу в брюшную полость куколки под углом примерно 30 градусов и постепенно введите пять нанолитров двухцепочечного раствора РНК гомологии тяжелой цепи ферритина. Инкубируйте около 700 куколок за одну обработку при температуре 25 градусов Цельсия в течение 24 или 48 часов.

Извлекайте содержимое РНК из 100 куколок на реплику. Примерно из 50 куколок за одну обработку наблюдайте за появлением ос. Наконец, запишите скорость появления ос и скорость деформаций.

Куколки T.dendrolimi, которым вводили гомологию тяжелой цепи двухцепочечного ферритина, демонстрировали значительно меньшую скорость появления по сравнению с теми, кому вводили двухцепочечную GFP или без инъекции. У появившихся ос у 51,85% ос T.dendrolimi, подвергшихся гомологии тяжелой цепи двухцепочечного ферритина, развились деформированные маленькие крылья. Эта деформация отсутствовала у ос, которым вводили двухцепочечную GFP или без инъекции.

Кроме того, у куколок T.dendrolimi, которым вводили гомологию тяжелой цепи двухцепочечного ферритина, наблюдался меланизм, свидетельствующий об аномальном метаболизме железа. Меланин не наблюдался у ос, которым вводили двухцепочечную GFP, или у ос, которым не вводили никаких инъекций.