Приготовление анаэробной жидкой среды в питательных бутылях для выращивания анаэробных микроорганизмов окружающей среды

Для начала отмерьте и добавьте необходимые компоненты среды в 1-литровую бутылку. Отрегулируйте pH в соответствии с интересующей микробной культурой и смешайте компоненты до однородности, вкручивая флакон. Нагрейте жидкость до кипения в микроволновой печи в течение пяти-шести минут, часто открывая микроволновую печь и осторожно вращая бутылку с помощью термостойкой перчатки.

Затем подсоедините стерильную стеклянную пипетку объемом 10 миллилитров к установленному коллектору газообразного азота. Откройте коллектор, чтобы выпустить кислород и выпустить газообразный азот. Поместите наконечник пипетки в жидкость и отрегулируйте поток газа так, чтобы пузырьки были умеренно энергичными.

Промывайте жидкость азотом до тех пор, пока бутылка не станет слишком горячей на ощупь. В ожидании, пока флакон остынет, выставьте 10 стерильных флаконов с культурой объемом 100 миллилитров. Как только флакон с носителем нагреется до приемлемой температуры, потяните наконечник пипетки вверх в свободное пространство флакона.

Добавьте 0,125 грамма гидрокарбоната натрия и 0,3 грамма нонагидрата сульфида натрия и подождите, пока резазурин не станет бесцветным. В ожидании изменения цвета резазурина прикрепите к установке газового коллектора металлические канюли. Отрегулируйте поток азота до умеренной скорости и поместите кончики канюль в бутылки с культуральными культурами.

После того, как резазурин станет бесцветным, добавьте 50 миллилитров жидкости в каждую культуральную бутылку. Укупорите каждую бутылку резиновой пробкой подходящего размера сразу после извлечения канюль. Затем закрепите пробку алюминиевым уплотнителем.

Поместите бутылки в автоклавируемый контейнер и наполните контейнер водопроводной водой, пока уровень воды не сравняется с уровнем воды в бутылках. Автоклавируйте бутылки при температуре 121 градус Цельсия в течение 30 минут.