Трансплантация органоидов мозга человека в хориоаллантоисную мембрану эмбриона цыпленка для нейроваскулярного моделирования

Для начала получают органоиды мозга из эмбриональных стволовых клеток Н9 и получают только что оплодотворенные куриные яйца. В первый день очистите поверхность яичной скорлупы 70%-ным этиловым спиртом и дайте ей высохнуть. Наложите хирургическую бумажную лейкопластырную повязку поверх яйца.

С помощью лампы определите самую тонкую поверхность яичной скорлупы на верхнем кончике. Затем стерильной иглой аккуратно проколите яичную скорлупу, чтобы создать отверстие в воздушной камере, не беспокоя камеру цыпленка. Чтобы защитить зародыш от внешней среды, накройте отверстие воздушной камеры новой повязкой и инкубируйте яйцо при температуре 38 градусов по Цельсию.

На седьмой день снимите повязку и протрите поверхность яичной скорлупы 70%-ным этиловым спиртом. Затем наложите новую, большую повязку, закрывающую наращивание. Аккуратно проколите яичную скорлупу, чтобы увеличить отверстие до двухсантиметрового отверстия для прививки.

С помощью пинцета удалите края окна яичной скорлупы и снимите повязку, чтобы удалить оставшуюся пыль и кусочки яичной скорлупы. С помощью стерильного широкомерного наконечника соберите органоид в 50 микролитров PBS и аккуратно перенесите его на камеру, противоположную расположению эмбриона. Добавьте семь микролитров спичечного геля вокруг органоида.

Заклейте окно с помощью парапленки и прикрепите ее к оболочке с помощью лейкопластыря. Инкубируйте трансплантат для кулачковой дифференциации. Через пять дней снимите лейкопластырь.

С помощью ножниц и тонкого пинцета увеличьте окно, чтобы облегчить сбор образца. Зафиксируйте его 4%-ным параформальдегидом на две минуты и соберите 1,5-сантиметровый участок кулачка, содержащий органоид. Для подтверждения успешной пересадки проводят окрашивание гематоксилином и эозином срезов ткани кулачка толщиной 20 мкм с органоидом.

Окрашивание ткани трансплантата гематоксилином и эозином указывало на то, что органоиды продолжали созревать рядом с кулачковыми сосудами без каких-либо признаков инфильтрации кровеносных сосудов.