1 Начните с того, что положитена верстак 2 стеклянный сцинтилляционный флакон, содержащий 3 мышиный scBAT в PBS. 4 Замените PBS 10 миллилитрами холодного, 5 4% параформальдегида. 6 Поместите флакон на нутатор, 7 покачиваясь при четырех градусах Цельсия на ночь 8, чтобы зафиксировать scBAT.
9 На следующий день замените раствор параформальдегида 10 на 10-15 миллилитров PBS. 11 Поместите флакон на орех 12 и покачивайте на 30 минут при комнатной температуре. 13 Замените PBS на 0,85% физиологический раствор 14 и продолжайте раскачивать еще 30 минут.
15 Затем замените солевой раствор на 10 миллилитров 16 70% этанола, 0,85% физиологического раствора. 17 Храните флакон в холодильнике при температуре четыре градуса в течение ночи 18 или до тех пор, пока он не будет готов к засыпке парафина. 19 На следующий день удалите из флакона 70%-ную этаноловую солевую смесь 20 и добавьте от 10 до 15 миллилитров 21 95%-ного дегидрантного спирта.
22 Покачайте флакон на орехе при комнатной температуре 23 в течение одного часа. 24 После второй промывки добавьте от 10 до 15 миллилитров 25 100% дегидрантного спирта 26 и продолжайте качать на нутаторе в течение часа. 27 Чтобы очистить scBAT для встраивания, добавьте 10 миллилитров толуола 28 во флакон и продолжайте покачивать на нутаторе 29 до тех пор, пока scBAT не станет прозрачным.
30 Затем погрузите scBAT в парафин. 31 Разрежьте scBAT с микротомом 32 и приступайте к окрашиванию гематоксилином и эозином. 33 Окрашивание гематоксилином и эозином подтвердило 34, что scBAT содержит характерные для 35 ткани бурой жировой ткани 36 многочисленные мелкие мультилокулярные адипоциты 37 как у постнатальных, так и у взрослых мышей.
