Количественная оценка колонизации Bacillus velezensis корнями Arabidopsis thaliana

Для начала взвесьте две миллилитровые трубки и запишите начальный вес как w0. Соберите ткани корня Arabidopsis thaliana и трижды промойте их в стерильной воде. Поместите корень на фильтровальную бумагу, чтобы удалить лишнюю воду.

Переложите корни в предварительно взвешенную микроцентрифужную пробирку. Взвесьте корни с помощью трубки и запишите как w1. Далее добавьте в пробирку 1 миллилитр PBS и Vortex на восемь минут на максимальной скорости.

Суспензии, содержащие колонизированные корнями бактериальные клетки, разбавляют с 1 на 10 до отрицательного 1-го до 1-го на 1 к отрицательному 5-му. Разбавленные бактериальные суспензии распределите по агаровым пластинам Лурия-Бертани и инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия в течение 10 часов. После инкубации подсчитайте колонии бактерий на планшетах с агаром Лурия-Бертани.

Рассчитайте колониеобразующие единицы в соответствии с соответствующим разведением и нормализуйте данные с помощью свежего веса корня, чтобы получить количество колонизированных бактериальных клеток на грамм корня. Через два дня после инокуляции колонизация Bacillus velezensis дикого типа SQR9 и производного мутанта дельта-8мцп продемонстрировала значительное снижение колонизации корней дельта-8мцф, что свидетельствует об эффективности этого состояния и метода в измерении колонизации бактерий.