Трансплантация сфероидов печени в переднюю камеру глаза мыши для визуализационных исследований

Для начала соберите все необходимые ресурсы и очистите шприц, трубку и канюлю Hamilton 70% этанолом, а затем солевым раствором. Заполнив их физиологическим раствором, прикрепите шприц Гамильтона к скамье горизонтально. Далее подготовьте наркозный аппарат Изофлурана и прогрейте грелку до 37 градусов Цельсия.

Накройте кончики щипцов, прикрепленных к твердому универсальному соединению, куском полиэтиленовой трубки, чтобы образовалась петля. Используя пипетку объемом 200 микролитров и наконечник, перенесите сфероиды печени из 96-луночного планшета в 35-миллиметровую чашку для клеточной суспензии, содержащую поддерживающую среду. После обезболивания мыши переложите ее на грелку и обездвижите голову винтами.

Затем аккуратно вытащите глаз из глазницы и закрепите его щипцами. Чтобы предотвратить высыхание, нанесите каплю физраствора на оба глаза. С помощью шприца Гамильтона аспирируйте сфероиды печени под стереоскопом.

Поместите канюлю горизонтально на чистую поверхность. С помощью иглы 23-го калибра осторожно проколите роговицу и сдвиньте иглу в сторону, чтобы расширить разрез. Высушите сочащуюся водянистую влагу салфеткой и добавьте в глаз капли физиологического раствора, чтобы он оставался влажным.

Расположите канюлю вертикально, чтобы сфероиды печени притягивались к кончику, а затем аккуратно вставьте ее в отверстие. Используя шприц Гамильтона, медленно вытолкните печеночные стероиды в АПФ. Кончиком канюли осторожно протолкните роговицу снаружи, чтобы расположить сфероиды печени вокруг зрачка.

Через 5 – 10 минут освободите глаз от щипцов. Чтобы смазать и залечить роговицу, нанесите вазелиновую глазную мазь на прооперированный глаз. Перед пробуждением мыши введите обезболивающее средство подкожно, чтобы избежать послеоперационного дискомфорта.