Вскрытие всего глаза кролика и подготовка глазной ткани для гистологического анализа

После трансконъюнктивальной энуклеации кроличьего глаза немедленно поместить в 50 миллилитров 4%-ный параформальдегид и PBS на лед. Через 15 минут перенесите глаз в 100-миллиметровую чашку для препарирования и заполните чашку PBS, чтобы предотвратить высыхание глаза. Под диссекционным микроскопом, используя хирургическое лезвие, начните делать разрез на один миллиметр впереди лимбуса, сохраняя его параллельно плоскости радужной оболочки.

Вставьте изогнутые ножницы в первоначальный разрез и продолжайте резать по окружности, сохраняя расстояние в один миллиметр от лимба. Затем удалите роговицу с помощью щипцов и аккуратно сотрите PBS лабораторной салфеткой. Поместите роговицу в 30% раствор сахарозы при комнатной температуре для криозащиты.

Сделайте первоначальный разрез изогнутыми ножницами через радужную оболочку. Затем разрежьте по окружности вокруг глаза, аналогично удалению роговицы, чтобы отделить радужную оболочку от остальной ткани. Удалите радужную оболочку щипцами и аккуратно сотрите излишки PBS с помощью лабораторной салфетки.

Поместите ирис в 30% раствор сахарозы комнатной температуры для криозащиты. После удаления роговицы и радужной оболочки поместите в глаз 50 миллилитров 4% параформальдегида и положите его на шейкер для легкого возбуждения. Оставьте глаз в 4% параформальдегиде при температуре четыре градуса Цельсия на ночь.

На следующий день поместите глаз в чашку для вскрытия и заполните чашку PBS. Под микроскопом для вскрытия с помощью щипцов осторожно захватите капсулу передней части хрусталика. Затем осторожно введите ножницы в заднюю камеру, ориентируя лезвия кзади вдоль линзы.

Сделайте первоначальный разрез через зонулы объектива изогнутыми ножницами. Продолжайте делать небольшие надрезы по окружности через зонулы линзы. Чтобы подтвердить снятие хрусталика, аккуратно возьмитесь за переднюю капсулу хрусталика щипцами и попытайтесь поднять ее.

После отделения поместите линзу в 30% раствор сахарозы комнатной температуры для криозащиты. Поместите в глаз 50 миллилитров 30% сахарозы и PBS при температуре четыре градуса Цельсия на 24-48 часов для криозащиты. Чтобы ускорить криозащиту, замените первоначальный раствор сахарозы на свежий через восемь-12 часов.