Приготовление обогащенной суспензии живых клеток для выделения ядер из клеток крови, полученных из iPSC

Для начала достаньте криопробирку с клетками из жидкого азота и разморозьте ее на водяной бане при температуре 37 градусов Цельсия в течение двух минут. После переноса размороженных клеток в 15-миллилитровую пробирку постепенно добавляйте 10 миллилитров предварительно подогретой среды и центрифугируйте пробирку. Откажитесь от надосадочной жидкости и ресуспендируйте клетки в одном миллилитре добавки DPBS, содержащей FBS и хлорид кальция.

Затем смешайте один миллилитр клеточной суспензии с 50 микролитрами каждого из коктейлей для удаления мертвых клеток и коктейля выбора биотина в пятимиллилитровой полистирольной пробирке с круглым дном и инкубируйте. После вортекса добавьте в клеточную суспензию 100 микролитров шариков декстрана, и дважды аккуратно перемешайте пипеткой. Затем добавьте в смесь 1,3 миллилитра дополненного ДПБС и выдерживайте с помощью магнита в течение трех минут при комнатной температуре.

Переверните магнит и пробирку налейте суспензию живых клеток в новую 15-миллилитровую коническую трубку. Поместите клетки в центрифугу. После удаления большей части надосадочной жидкости суспендировать клетки в одном миллилитре DPBS, содержащем 0,04% бычьего сывороточного альбумина.