Начните с размещения животного под наркозом на операционной платформе. Нанесите смазывающую глазную мазь на глаза каждого животного, чтобы предотвратить высыхание роговицы во время операции. Продезинфицируйте выбритое место операции тремя чередующимися раундами повидон-йода и изопропанола.
Затем подложите рулон бумажного полотенца или трубку диаметром 1,5 сантиметра под животное ровно до бедер. Накидывайте на животное фенестрированную простыню, центрируя фенестрацию над поясничным отделом позвоночника для хирургического доступа. Чтобы проверить глубину анестезии у животного, ущипните каждую лапу и понаблюдайте за отсутствием какой-либо реакции отмены.
Затем с помощью лезвия скальпеля под номером 11 сделайте трехсантиметровый разрез кожи по средней линии от позвонков L2 до L6. Теперь вставьте стерильные изогнутые хирургические ножницы между мышцей и кожей и осторожно раскройте кончики, чтобы отделить кожу от основной мышцы. Удалите фасцию, покрывающую остистые отростки позвонков от L2 до L5.
Внесите от 25 до 35 микролитров вектора AAV9 в колпачок стерильной микроцентрифужной пробирки. Наберите весь объем вектора от колпачка в инсулиновый шприц. Затем определите остистые отростки L5 и L4 на животном.
Расположите иглу шприца слева от остистого отростка L5, выровняв его с каудальным концом отростка. Продвиньте иглу шприца вперед примерно на восемь миллиметров над пластинкой L5, а затем под пластинкой L4 в поясничный бачок до тех пор, пока не произойдет контакт с костью. Медленно нажмите на поршень шприца в течение примерно пяти секунд.
Затем медленно извлеките иглу из места введения. Используя шов 4-0 или хирургические скобки, начните закрывать разрез с одного конца раны. Чтобы оценить успешность введения красителя, после усыпления животного сделайте четырехсантиметровый разрез в мышце, параллельной позвоночнику с обеих сторон остистых отростков.
С помощью щипцов или ножниц для позвоночника аккуратно удалите мышцу между остистыми отростками. С помощью ронжера извлеките остистые отростки от L6 к нижней части грудного отдела позвоночника. Вставьте нижний кончик ронжера под пластинку L5 и методично удалите кость, находящуюся над спинным мозгом, вынув из нее несколько откусов.
