Выделение и канюляция брыжеечных лимфатических сосудов для измерения цитозольного, свободного кальция и диаметра сосудов в сокращающихся лимфатических сосудах

Для начала возьмите плетеную шелковую шовную нить и разделите ее на одну нить. Используйте два щипца Dumont 5 с микропритупленными наконечниками и щипцами, чтобы сделать двойную петлю вокруг кончика других щипцов. С помощью петлевых щипцов возьмитесь за свободный конец шва и осторожно протяните его через обе петли.

Используйте пружинные ножницы Vannas, чтобы обрезать лишние швы с обеих сторон. Обезглавив усыпленную крысу, сделайте продольный надрез по средней линии брюшной стенки. Затем очистите брыжейку снаружи.

Отрежьте соединение чуть ниже пилорического сфинктера, примерно на два-три сантиметра выше слепой кишки, а также соединение с прямой кишкой. Затем рассеченные целые брыжейки промойте в 200 миллилитрах ледяного физиологического раствора соли. Затем перенесите и закрепите их в силиконовой подкладке чашки Петри, содержащей ледяной физиологический раствор соли.

С помощью стереомикроскопа, тонких щипцов Dumont 5 inox и пружинных ножниц Vannas рассекают брыжеечные лимфатические сосуды второго порядка из окружающего жира и соединительной ткани. Теперь перенесите рассекреченный лимфатический сосуд в камеру для канюляции на стеклянных канюлях. Наденьте один красивый узел на каждую стеклянную канюлю, готовясь к последующему закреплению сосуда на канюлях.

С помощью небольшого кусочка жира сориентируйте направление лимфатического сосуда и канюлируйте дистальный конец на P1. Сдвиньте узел вниз по канюле и затяните его, чтобы зафиксировать лимфатический сосуд. Затем нагнетайте давление в лимфатический сосуд, чтобы укрепить миллиметры ртутного столба в перфузионной камере. Поместите пузырящийся камень с 7% углекислого газа и 93% кислорода в камеру ванны для поддержания физиологического pH.

Подключите камеру к регулятору температуры и установите ее на 37 градусов Цельсия.