Двухфотонная визуализация трансплантата легких мыши для изучения клеточной динамики и взаимодействий в режиме реального времени

Для начала поместите интубированную мышь с открытой торакотомией на опорную пластину камеры визуализации открытой левой грудной клеткой вверх. С помощью шелковой ленты закрепите мышь на ее морде, передних лапах и хвосте. Нанесите клей на нижнюю сторону покровного стекла, прикрепленного к верхней пластине.

Затем опустите верхнюю пластину до тех пор, пока покровное стекло не соприкоснется с легким, позволяя клею коснуться поверхности легкого. Прижмите покровное стекло к легкому. Надувайте легкое в течение одной-двух секунд, чтобы участок клея прилип к окружающим тканям.

Наденьте накатанную гайку на каждый болт и закрепите верхнюю пластину. Для двухфотонной визуализации поместите всю камеру визуализации с мышью на предметный столик микроскопа. Используйте дихроичные фильтры, чтобы отделить сигналы от репортера GFP, точки Q и коллаген генерируют сигнал ГСП.

Затем установите титановый сапфировый фемтосекундный импульсный лазер на длину волны возбуждения 890 нанометров при минимально возможной мощности. Нанесите один миллилитр воды на покровное стекло на верхней пластине. Теперь опустите объектив погружения в воду и сосредоточьтесь на поверхности легкого.

Включите нагреватель опорной плиты, поддерживая температуру в диапазоне от 35 до 37 градусов по Цельсию. Приобретайте стеки изображений с помощью программного обеспечения для сбора изображений. Через 24 часа после трансплантации в легких было больше нейтрофилов по сравнению с двумя часами после трансплантации.