Для начала извлеките из морозильной камеры криовиал, содержащий CD34+ клетки пуповинной крови. Разморозьте клетки на водяной бане, прежде чем переложить их в 50-миллилитровую трубку. Встряхивая пробирку по каплям, добавьте в пробирку в 10 раз больше объема ячеек, чем предварительно подогретая IMDM, содержащая 50% FBS и 0,1 миллиграмма на миллилитр ДНКазы.
Центрифугируйте клеточную суспензию при 500 G в течение пяти минут. Ресуспендируйте гранулу в дозе от 20 до 40 микролитров PBS, содержащей пенициллин и стрептомицин. Храните клетки на льду до использования.
Приготовьте трехмиллилитровый шприц с полудюймовой иглой 27-го калибра. Приготовьте инсулиновый шприц объемом 0,5 мл с иглой 29-го калибра 12,7 мм, содержащей суспензию CD34+клеток пуповинной крови. Затем приготовьте инсулиновый шприц объемом в один миллилитр с иглой 29-го калибра 0,5 дюйма со 100 микролитрами бупренорфина.
Перенесите мышь, находящуюся под наркозом, в носовой конус и выполните ущипывание пальца ноги, чтобы подтвердить ее готовность к инъекции. Положите мышь на спину и согните задние лапки. Чтобы закрепить задние ноги, поместите большой палец недоминантной руки на стопу, средний палец — на бедро, а указательный — на внешнюю сторону бедренной кости.
Аккуратно выщипните волосы вокруг коленной чашечки и протрите эту область спиртовым тампоном. Теперь с помощью трехмиллилитрового шприца с полудюймовой иглой 27-го калибра аккуратно просверлите отверстие в коже по направлению к бедренной кости. Как только игла окажется в кости, вращайте ее по часовой стрелке, пока вся игла не окажется в кости.
Извлеките иглу вращением против часовой стрелки до половины. Протрите вокруг иглы спиртовым тампоном и продолжайте поворачивать иглу против часовой стрелки для полного удаления. Далее введите 0,5 миллилитра инсулинового шприца, содержащего клеточную суспензию, в ствол бедренной кости.
Как только игла окажется в кости, ослабьте хватку на ноге и аккуратно введите 25 микролитров суспензии в бедренную кость. Наконец, введите бупренорфин подкожно и верните мышь в ее домашнюю клетку, позволяя ей восстановиться после анестезии.
