Для начала с помощью ножниц и тупых щипцов поднимите и разрежьте кожу мыши, находящейся под наркозом, над правой яремной веной. Вырежьте на коже круглое окошко, достаточно большое, чтобы обнажить яремную вену и часть окружающих тканей. Аккуратно отодвиньте жировую ткань, лимфатические узлы и соединительную ткань с помощью техники тупого рассечения.
Далее наполните 20-миллилитровый шприц обычным физиологическим раствором, подогретым до 37 градусов Цельсия. Загрузите шприц в шприцевой инфузионный насос. Затем прикрепите к шприцу иглу-бабочку 27 калибра и соответствующую трубку.
Установите шприцевой насос на скорость потока 0,5 миллилитра в минуту, чтобы смыть кровь с проколотой вены или артерии. Расположите струю физраствора на несколько миллилитров сбоку от места прокола, а не прямо над ним. После того, как яремная вена будет очищена, запустите таймер.
Приобретите иглы для подкожных инъекций 30 и 33 калибра для яремной вены и бедренной артерии соответственно. Поверните фаску лицевой стороной вверх. Затем расположите иглу под углом 25 градусов над яремной веной или бедренной артерией.
Отметив время, быстро проколите верхнюю часть сосуда. Обратите внимание на время, необходимое для полной остановки кровотечения. Дождитесь образования тромба перед началом перфузионной фиксации.
После завершения перфузии рассеките часть яремной вены с местом пункции и тромбом. С помощью острых ножниц сделайте диагональный разрез поперек дистального конца сегмента сосуда и сделайте прямой разрез поперек проксимального конца сегмента сосуда. Затем поместите неподвижную ткань при температуре четыре градуса Цельсия на 24 часа.
На следующий день налейте буферный раствор какодилата натрия в 35-миллиметровую чашку для культур, содержащую силиконовый коврик толщиной пять миллиметров. Осторожно перенесите ткань в буфер, следя за тем, чтобы она была погружена в буфер. С помощью мельчайших булавок из нержавеющей стали и пары тонких щипцов аккуратно приколите каждый конец сосуда к коврику.
Тщательно очистите яремную вену. С помощью микроножниц разрежьте стенку сосуда напротив места прокола вдоль. Аккуратно откройте сосуд, затем прикрепите его к силиконовому коврику внутрипросветной стороной вверх.
Удалите буферный раствор из чашки. Затем добавьте 1% параформальдегида, чтобы погрузить сосуд. Сразу же накройте блюдо крышкой, чтобы предотвратить пересыхание.
