Для начала получите эмбрионы от только что спаренной самки мыши. Приготовьте 12 микрокапель Potassium Simplex Optimized Medium на дно 35-миллиметровой чашки Петри. Залейте микрокапли тремя-пятью миллилитрами минерального масла и поместите чашки Петри в инкубатор при температуре 37 градусов Цельсия с 5% углекислым газом для уравновешивания.
С помощью передаточной пипетки перенесите эмбрионы мышей из среды М2 в среду КСОМ. Поместите промытые эмбрионы в подготовленные микрокапли КСОМ, и инкубируйте их при температуре 37 градусов Цельсия с 5% углекислым газом в течение четырех дней. Выбирайте бластоцисты в зависимости от их размера, внутренней массы клеток, количества клеток трофобласта и степени расширения.
Добавьте один миллилитр 2%-ного желатина в 12-луночный планшет для культивирования и инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия в течение 30 минут. Затем отсадите излишки желатина, и дайте дну тарелки полностью высохнуть. Поместите клетки аденокарциномы эндометрия человека или клетки Исикавы в 12-луночную пластину, покрытую желатином, и инкубируйте пластину в течение 24 часов.
Аккуратно поместите от пяти до 15 свежих бластоцист в каждую лунку 12-луночного планшета, содержащего клетки. Через 48 часов понаблюдайте за эмбрионами под микроскопом, чтобы оценить состояние их прикрепления после трех перемещений планшета. Неприкрепленные эмбрионы будут плавать или перекатываться по поверхности клеток.
Наконец, рассчитайте скорость имплантации эмбриона в присутствии различных концентраций эстрогенов. Результаты показали, что близкие к физиологическим концентрации 17 бета-эстрадиола увеличивают частоту имплантации эмбрионов по сравнению с контролем без 17 бета-эстрадиола. Тем не менее, сверхвысокие концентрации 17 бета-эстрадиола около 100 наномоляров значительно снижали скорость имплантации эмбрионов.
