Размножение in vivo и сбор GFP-меченых клеток T-ALL рыбок данио

Для начала разморозьте флакон, содержащий один миллилитр замороженных Т-ОЛЛ меченых GFP клеток данио-рерио, на водяной бане при температуре 37 градусов Цельсия, слегка встряхивая. Медленно пипеткой нанесите содержимое флакона в 15-миллилитровую коническую пробирку, содержащую четыре миллилитра рыбьей среды на льду. Уменьшите температуру клеток при 2500 G в течение пяти минут при четырех градусах Цельсия и выбросьте супернат, прежде чем снова суспендировать гранулу в 0,5 миллилитрах рыбной среды.

Добавьте 10 микролитров клеточной суспензии в микроцентрифужную пробирку, содержащую 10 микролитров трипанового синего красителя. Хорошо перемешайте и перенесите 10 микролитров на гемоцитометр и посчитайте клетки под микроскопом. Затем держите взрослого данио-рерио под наркозом под наркозом CG1 брюшной стороной вверх.

С помощью микрошприца Гамильтона введите пять-шесть микролитров клеточной суспензии во внутрибрюшинное пространство. Примерно через 21–28 дней после трансплантации оцените процент меченых GFP лейкозных клеток у рыбок данио, находящихся под наркозом. Чтобы собрать клетки лейкемии, переместите усыпленных рыбок данио в новую чашку Петри и добавьте один миллилитр рыбной среды, которая будет служить буфером для клеток.

С помощью лезвия бритвы сначала обезглавьте рыбку данио, затем вымацерируйте ткань. Проводите пипеткой вверх и вниз, чтобы вытеснить большие скопления клеток. Пропустите клеточную суспензию через клеточный фильтр толщиной 40 микрон в 50-миллилитровую коническую пробирку для диссоциации в одноклеточную суспензию.