Количественная оценка связности моторного блока диафрагмы крысы с помощью электрофизиологии

Для начала подготовьте и расположите крысу под наркозом для электрофизиологии. Применяйте монофазные катарсические импульсы прямоугольной волны для стимуляции диафрагмального нерва для регистрации ответов CMAP. Увеличивайте интенсивность стимула постепенно, пока амплитуда ответа не перестанет увеличиваться.

Затем увеличьте интенсивность стимула примерно до 120% от уровня, необходимого для максимальной реакции, чтобы обеспечить сверхмаксимальную стимуляцию и записать дополнительную реакцию. Измеряйте и документируйте размаховые амплитуды CMAP в милливольтах. Проводят субмаксимальную стимуляцию продолжительностью 0,1 миллисекунды с частотой 1 герц.

Постепенно увеличивайте интенсивность с шагом 0,03 миллиампера, чтобы вызвать инкрементную реакцию до тех пор, пока не будет достигнута минимальная реакция «все или ничего». Затем получите первоначальную реакцию с интенсивностью стимула в диапазоне от 2 до 10 миллиампер. После сохранения первого инкрементного ответа приобретайте дополнительные приращения с постепенно возрастающей интенсивностью стимула с шагом 0,03 миллиампера.

Убедитесь, что начальный отрицательный пик инкрементальных ответов совпадает по времени с отрицательным пиком максимального ответа CMAP. Учитывая участие диафрагмы в дыхании, проверьте стабильность и отсутствие фракционирования в каждом инкрементном ответе, чтобы убедиться в согласованности трех повторяющихся ответов. Наблюдайте за инкрементальными откликами в режиме реального времени и накладывайте их на предыдущие записи для визуального различия.

Затем подтвердите, что амплитуда приращения составляет не менее 25 микровольт. После записи 10 инкрементных ответов убедитесь, что амплитуда каждого инкремента не превышает 1/3 от общей амплитуды конечного ответа. Чтобы оценить среднюю амплитуду SMUP, усредните значения 10 приращений.

Затем разделите максимальную амплитуду CMAP на среднюю амплитуду SMUP, чтобы определить MUNE. Через семь дней после внутриплеврального введения CTB-SAP MUNE снизился до 60 функциональных двигательных единиц у взрослых крыс по сравнению с 74 у контрольных крыс. Амплитуда CMAP оставалась относительно стабильной, что позволяет предположить коллатеральное прорастание в качестве возможного компенсаторного механизма.

Диафрагму, CMAP, SMUP и MUNE измеряли в течение 28 дней после инъекции. CMAP не показал заметных изменений. Среднее увеличение SMUP для крыс CTB-SAP составило примерно от 50 до 60%Изменения были значительными с течением времени и были связаны с CTB-SAP.

MUNE был снижен примерно на 40% у крыс CTB-SAP, что указывает на значительное влияние времени на лечение CTB-SAP.