Для приготовления одноклеточной суспензии костного мозга из кальварии мыши, под препарирующим микроскопом осторожно отслаивают твердую мозговую оболочку от изолированного черепа с помощью тупых щипцов. Поместите кальварию в посуду с ПБС, находящуюся на льду, и с помощью пипетки объемом в один миллилитр прополощите ее, обеспечив удаление остатков крови с ее поверхности. Переложите кальварию в новую посуду, содержащую достаточно свежего холодного PBS, достаточного для погружения в него.
С помощью стерильных ножниц разрежьте кальварию на фрагменты примерно три на три миллиметра в холодном PBS. С помощью иглы 18 калибра проткните отверстие в дне микроцентрифужной пробирки объемом 500 микролитров. Вставьте эту пробирку в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 миллилитра, содержащую 20 микролитров холодного PBS.
Затем переложите фрагменты кальварии в пробирку объемом 500 микролитров. Центрифугируйте установку при 10 000 g в течение 30 секунд при четырех градусах Цельсия. Ресуспендируйте собранные клетки костного мозга calvaria в 500 микролитрах буфера для лизиса эритроцитов и инкубируйте при комнатной температуре в течение 30 секунд.
Перенесите суспензию в центрифужную пробирку объемом 15 миллилитров, содержащую четыре миллилитра холодного PBS. Центрифугируйте при 400 г в течение шести минут при четырех градусах Цельсия. Умойтесь еще один раз пятью миллилитрами холодной PBS.
Наконец, восстановите клеточное нёбо в подходящем буфере.