Приготовление суспензии одноклеточных клеток костного мозга из мышиной кальварии для изучения иммунного ответа на заболевания головного мозга

Для приготовления одноклеточной суспензии костного мозга из кальварии мыши, под препарирующим микроскопом осторожно отслаивают твердую мозговую оболочку от изолированного черепа с помощью тупых щипцов. Поместите кальварию в посуду с ПБС, находящуюся на льду, и с помощью пипетки объемом в один миллилитр прополощите ее, обеспечив удаление остатков крови с ее поверхности. Переложите кальварию в новую посуду, содержащую достаточно свежего холодного PBS, достаточного для погружения в него.

С помощью стерильных ножниц разрежьте кальварию на фрагменты примерно три на три миллиметра в холодном PBS. С помощью иглы 18 калибра проткните отверстие в дне микроцентрифужной пробирки объемом 500 микролитров. Вставьте эту пробирку в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 миллилитра, содержащую 20 микролитров холодного PBS.

Затем переложите фрагменты кальварии в пробирку объемом 500 микролитров. Центрифугируйте установку при 10 000 g в течение 30 секунд при четырех градусах Цельсия. Ресуспендируйте собранные клетки костного мозга calvaria в 500 микролитрах буфера для лизиса эритроцитов и инкубируйте при комнатной температуре в течение 30 секунд.

Перенесите суспензию в центрифужную пробирку объемом 15 миллилитров, содержащую четыре миллилитра холодного PBS. Центрифугируйте при 400 г в течение шести минут при четырех градусах Цельсия. Умойтесь еще один раз пятью миллилитрами холодной PBS.

Наконец, восстановите клеточное нёбо в подходящем буфере.