Для начала поместите платиновую арфу в весы рядом с платформой MEA. Затем накройте арфу примерно тремя миллилитрами арфы, чтобы уменьшить ее гидрофобные тенденции. С помощью ножниц отрежьте около 1,5 дюйма от узкого кончика переводной пипетки.
Затем с помощью модифицированной пипетки соберите срез мозга из камеры для хранения среза. Аккуратно выдавите срез мозга и любой раствор из пипетки в чип в лунку. Чтобы правильно расположить срез, используйте мягкую кисть для создания тока в растворе, который толкает срез мозга на записывающие электроды.
С помощью щипцов аккуратно поместите арфу на срез мозга нитями вниз, чтобы прижать срез к записывающим электродам. Ориентируйте арфу таким образом, чтобы сторона без рамы была обращена к входной игле и рама арфы не соприкасалась ни с одним из записывающих электродов. Теперь возьмите выброшенную пипетку и удалите излишки кислотномозговой жидкости.
Затем возьмите антистатическую салфетку, скрутите уголок, чтобы получился наконечник, и используйте его, чтобы впитать оставшийся aCSF вокруг записывающих электродов, не касаясь записывающих электродов, среза мозга или арфы. С помощью специальной пипетки aCSF быстро добавьте около двух миллилитров карбогенированного aCSF, чтобы покрыть срез мозга. Наполните колодец примерно тремя миллилитрами карбогенированного aCSF, пока он не заполнится примерно на три четверти.
Затем с помощью микроскопа или камеры сделайте снимок среза мозга с высоким разрешением на чипе MEA. Поместите входную и выходную трубки в стакан, наполненный спинномозговой жидкостью. Поместите впускную иглу близко к нижней части микросхемы, сразу за пределами записывающих электродов.
Затем поместите иглу оттока близко к верху чипа хорошо, ближе к краю, так, чтобы жидкость поднималась почти до краев чипа колодца, примерно на четыре миллилитра. Теперь установите приток перфузии на пять миллилитров в минуту, а отток перфузии на семь миллилитров в минуту. Включите приток и отток.
Хорошо снимите впускную иглу с чипа до тех пор, пока она не начнет выводить раствор вместо воздуха. После этого хорошо поместите иглу обратно внутрь чипа. Затем используйте нагреватель раствора, чтобы поддерживать физиологическую температуру раствора на физиологической или близкой к ней, около 34–37 градусов Цельсия.
Дайте ФКСФ прооперировать срез мозга в течение 10 минут. По истечении 10 минут переместите выпускную трубку к стакану для выброса. Затем переместите входную трубку к стакану, содержащему просудорожный раствор.
Дайте несудорожному аCSF вымыться из перфузионной системы в стакан для выброса в течение 10 минут. Наконец, перенесите выходную трубку в стакан, содержащий просудорожный раствор, и дайте ему циклически работать до окончания эксперимента. Мощная электрографическая судорожная активность часто наблюдалась в областях неокортекса как при нулевой магниевой, так и при 4-аминопиридиновой парадигме.
Области гиппокампа показали большую вариабельность между срезами мозга, причем некоторые из них демонстрировали судорожную активность, а другие — преходящие разряды. Неокортикальная активность в парадигме нулевого магния показала более высокую мощность в нескольких частотных диапазонах по сравнению с парадигмой 4-аминопиридина. Активность гиппокампа в парадигме нулевого магния продемонстрировала более высокую мощность в диапазонах высоких гамма-частот по сравнению с неокортексом и обеими областями мозга в парадигме 4-аминопиридина.
