Подготовка донорских клеток и рыбок данио-рерио хозяина к трансплантации клеток с целью изучения механизмов развития

Для начала нанесите на предметное стекло прямоугольный контур прозрачного лака для ногтей. Подготовьте несколько таких горок для пересадки. Для установки животного, находящегося под наркозом, используйте пастеровскую пипетку и насос, чтобы перевести его из RPT в легкоплавкую агарозу или LMA.

Затем перенесите животное в небольшой капле LMA на предметное стекло в контуре лака для ногтей. Прежде чем LMA затвердеет, используйте толкатель эмбрионов, чтобы ориентировать животное вертикально, так, чтобы предполагаемое место введения иглы было правым. И дать агарозе полностью застыть примерно пять минут.

С помощью скальпеля вырежьте прямой вертикальный срез через агарозную каплю справа от установленного животного. Сотрите с предметного стекла рыхлую агарозу. Используя скальпель, вырежьте клинья из агарозы, чтобы обнажить место введения иглы.

Наносите RPT на предметное стекло до полного погружения агарозных капель. И закрепите подготовленное предметное стекло на пересадочном микроскопе. Опустите объектив 40X до тех пор, пока он не выйдет за пределы фильтрующего материала, и поднимите его, чтобы сфокусироваться на донорском животном.

Затем сфокусируйтесь на интересующих вас флуоресцентно помеченных донорских клетках. Сдвиньте ступень влево, чтобы подготовиться к нахождению иглы для трансплантации.