Экстракция межклеточной промывочной жидкости из апопластов пшеницы для анализа ферментов, связанных с клеточной стенкой

Для начала дважды промойте кусочки пшеничных листьев в дистиллированной воде, чтобы удалить цитозольное загрязнение с обрезанных концов. Вставьте кусочки листьев в толстостенную стеклянную трубку, содержащую буфер для экстракции. С помощью водоструйного насоса примените вакуумную инфильтрацию в течение пяти минут, чтобы пропитать листья буфером для экстракции.

Извлеките кусочки листьев из стеклянной трубки и промокните их насухо бумажным полотенцем. Вставьте высушенные кусочки листьев вертикально в предварительно охлажденную центрифужную трубку с перфорированным диском. Центрифугируйте листья при 500G в течение 10 минут при 4 градусах Цельсия.

С помощью пипетки объемом 100 микролитров переложите надосадочную жидкость в предварительно охлажденную микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 миллилитров. Храните собранную надосадочную жидкость при температуре минус 20 градусов Цельсия до использования.