Fibrinogen-PAGE для анализа фибриногенолитических агентов в гомогенате арахисового червя

Для начала приготовьте гель для фибриногена фага и поместите его в резервуар для электрофореза вместе с формой для клея. Налейте в емкость 1 300 миллилитров раствора для электрофореза и выньте расческу из геля. Смешайте 5 микролитров 5-кратного неденатурирующего загрузочного буфера с 20 микролитрами фибриногенолитического фермента и гомогената арахисового червя.

Загрузите смесь в приготовленный гель и начните электрофорез при напряжении 80 вольт в течение 30 минут или 120 вольт в течение 20 минут. Выньте гель из клеевой формы и переложите его в пластиковую коробку. Добавьте в коробку Tris-HCL и Triton и инкубируйте его в шейкере при 60-70 об/мин в течение 10 минут.

Снимите буфер для промывки и инкубируйте гель с 50 миллилитрами 0,05 моляра Tris-HCL. После удаления буфера инкубируйте гель с 50 миллилитрами окрашивания, после чего следует раствор для обесцвечивания со скоростью от 60 до 70 об/мин в течение 30 минут каждый. Гомогенат арахисового червя имел полосы, соответствующие молекулярным массам 25, 33, 43 и 70 килодальтон или выше.