Приживаемость и заражение in vitro кустовых культур Pinus pinaster сосновыми нематодами

Для начала промойте сертифицированные семена Pinus pinaster в проточной водопроводной воде, чтобы удалить более крупный мусор. Затем промойте более мелкий мусор с помощью обычного моющего раствора с энергичным перемешиванием. В проточную вытяжку добавьте коммерческий раствор отбеливателя, пока семена не покроются, и энергично перемешивайте в течение 15 минут.

Выбросив раствор хлорной извести, трижды промойте семена стерилизованной водой из-под крана. Теперь погрузите семена в 80% этанол на 15 минут при энергичном перемешивании. После утилизации этанола трижды промойте семена стерилизованной сверхчистой водой.

Для проращивания сосны стерилизованные оболочки семян разбить стерильным механическим токарным станком. Изолируйте кедровые орехи и положите их в закрытый контейнер со стерилизованной влажной фильтровальной бумагой для увлажнения на ночь. На следующий день стратифицировайте гидратированные кедровые орехи при температуре четыре градуса Цельсия в течение семи дней, чтобы выйти из состояния покоя и синхронизировать прорастание.

Затем выдержите кедровые орехи в темноте при температуре 25 градусов Цельсия до появления всходов. Перенесите асептические пророщенные сосны в контролируемые условия окружающей среды на две недели или до тех пор, пока основной стебель не начнет развиваться. Через две недели надземную часть саженца надрежьте скальпелем над корнем и перенесите в стерилизованную питательную среду Schenk Hildebrandt.

Поддерживайте культуру в контролируемых условиях окружающей среды, как описано ранее. Периодически подкультуривают, разрезая мозолистую ткань у основания побега стерильным скальпелем. Перенесите побеговую гроздь с помощью стерильного пинцета в свежую питательную среду для размножения.

Затем инокулируйте микропобеги в питательную среду Schenk Hildebrandt, содержащую три грамма на литр активированного угля для удлинения микростеблей. Теперь поместите удлиненные побеги в питательную среду Schenk Hildebrandt без фитогормонов и активированного угля. Добавьте от 100 до 150 стерилизованных сосновых нематод смешанной стадии жизни на дно микропобега.

Поддерживайте культуру в контролируемых условиях окружающей среды, как описано ранее. Укоренение и заражение побегов сосны in vitro показало появление хлоротичной хвои в течение месяца совместной культуры с сосновыми древесными нематодами.