Встраивание образцов сетчатки для исследования фоторецепторов-синапсов с помощью объемной электронной микроскопии

Для начала возьмите полоски сетчатки у мышей и промойте их пять раз в 0,1 молярном буфере какодилата натрия в течение 15 минут. Затем инкубируйте полоски с раствором ферроцианида калия и тетраоксида осмия в темноте на льду в течение 1,5 часов. Промойте полоски три раза в двойной дистиллированной воде и инкубируйте их с 1%-ным тио-карбогидразидом.

После полоски дважды дистиллированной водой последовательно обработайте полоски сетчатки глаза тетраоксидом осмия, уранилацетатом и нитратом свинца. Обезвоживайте полоски сетчатки с увеличением концентрации этанола. Затем обработайте полоски сетчатки глаза, раствором, содержащим равное количество этанола и ацетона, в течение 20 минут, после чего последует два промывания ацетоном в течение 20 минут каждое.

Последовательно инкубируйте полоски сетчатки в смесях ацетоновых смол в темноте при комнатной температуре. Инфильтрируйте полоски сетчатки чистой смолой в течение 24 часов при температуре 45 градусов Цельсия, а затем свежей смолой в течение 48 часов при температуре 60 градусов Цельсия. Сканирующая электронная микроскопия с помощью сфокусированного ионного луча окончаний фоторецепторов сетчатки с использованием этого метода позволяет сохранить структуру клеточной мембраны и очертания везикул более четко, чем при традиционном методе двойной фиксации.