Для начала приобретите поверхностно стерилизованных комаров в 1,5-миллилитровой пробирке, содержащей PBS. Перенесите очищенного комара на каплю стерильного 1X PBS, помещенную на предметное стекло микроскопа. С помощью пинцета держите грудную клетку комара, чтобы он не двигался.
Затем поместите иглу на шею чуть ниже головы и осторожно потяните за голову комара, чтобы отделить ее от грудной клетки. С помощью иглы разрежьте слюнные железы на уровне слюнных протоков. Извлеките железы с помощью иглы и поместите их в новую каплю PBS для полоскания.
Далее, с помощью иглы, извлеките слюнные железы. Положите комара на спину, чтобы начать рассекать яичники. С помощью щипцов удерживайте комара за грудную клетку, чтобы предотвратить движение, и проколите иглой третий брюшной сегмент, начиная снизу.
Прокалывая третий брюшной сегмент, потяните вниз живот, чтобы раскрыть его и обнажить внутренние органы. Удалите все оставшиеся части экзоскелета комара, чтобы облегчить высвобождение органов. Извлеките оба яичника с помощью стерилизованных щипцов и поместите их в новую каплю стерильного PBS на предметном стекле микроскопа для промывки.
Переложите промытые яичники в 1,5-миллилитровую пробирку, содержащую 100 микролитров консервационного буфера. Далее с помощью стерильной иглы отделите среднюю кишку от передней и задней кишки. Удалите мальпигиевые канальцы из средней кишки и поместите среднюю кишку в новую каплю стерильного PBS, чтобы промыть ее и предотвратить загрязнение.
Затем переложите среднюю кишку в другую каплю стерильного PBS. С помощью щипцов откройте среднюю кишку, чтобы выпустить бактерии. Пипетка всех PBS-содержащих бактерий и тканей средней кишки в новую стерилизованную пробирку объемом 1,5 миллилитра, содержащую 100 микролитров консервационного буфера.
Добавьте пять микролитров PBS на ту же область предметного стекла микроскопа, где ранее была размещена средняя кишка. Поместите PBS обратно в ту же 1,5-миллилитровую трубку, чтобы извлечь все бактерии, которые могли прилипнуть к предметному стеклу. Наконец, с помощью стерильных щипцов захватите тушу комара и храните его в стерилизованной пробирке объемом 1,5 миллилитра, содержащей 100 микролитров консервационного буфера.
