Для начала подготовьте инокулюм для изучения кинетики роста Chlorella sorokiniana и Haematococcus pluvialis Подготовьте необходимый объем стерильной питательной среды в соответствии со стандартными лабораторными процедурами. Настройте источник света как для фотобиореактора, так и для колбы на нужный цветовой спектр. Накройте обе системы, чтобы предотвратить внешние световые помехи.
После настройки фотопериода подключите систему продолжительности углекислого газа к фотобиореактору, чтобы обеспечить хлореллу углекислым газом в течение 12 часов. Затем инокулируйте культуральный сосуд для достижения начальной плотности клеток 300 000 клеток на миллилитр или оптической плотности 0,180 на 550 нанометрах. Отбирайте образцы культуры через равные промежутки времени в 12 часов для Chlorella sorokiniana и восемь часов для Haematococcus pluvialis.
Поместите 40 миллилитров образца в пластиковую коническую центрифужную трубку. Центрифугируйте пробирку при 3000 G в течение 20 минут при 15 градусах Цельсия. Сцедите надосадочную жидкость и добавьте три миллилитра 90% чистого раствора ацетона для ресуспендирования клеток, затем переложите клетки в стеклянную трубку, покрытую алюминиевой фольгой, чтобы предотвратить окисление, и перемешайте с помощью вихря.
Ультразвуком обрабатывайте взвешенный образец на ледяной бане в течение двух циклов по пять минут каждый и дайте образцу отдохнуть при температуре четыре градуса Цельсия в течение 16 часов. После отдыха снова обработайте образец ультразвуком в течение двух циклов по пять минут каждый в тех же условиях и центрифугируйте образец при 3000 G в течение 20 минут при 15 градусах Цельсия. Отделите пигментный экстракт с помощью пастеровской пипетки и переложите его в другую чистую пробирку, защищенную от света.
Затем поместите экстракт пигмента в кварцевую ячейку и считайте его в спектрофотометре на 600, 647 и 664 нанометрах. Рассчитайте концентрацию хлорофилла с помощью уравнения. Содержание хлорофилла в Chlorella sorokiniana было самым высоким в четвертой обработке в условиях высокого добавления углекислого газа, фиолетового света и высокой интенсивности света.
График основных эффектов показал, что интенсивность света имеет меньший эффект по сравнению с эффектами углекислого газа и фиолетового света. У Chlorella sorokiniana наблюдалось последовательное увеличение хлорофиллов А и В на протяжении всего эксперимента, при этом хлорофилл А превосходил хлорофилл В через 50 часов. Снижение концентрации хлорофилла наблюдалось у Haematococcus pluvialis через 50 часов, при этом содержание хлорофилла В значительно снизилось, в то время как содержание хлорофилла А оставалось высоким.
