Авторы выражают благодарность Нико Zantl, Клаус Пфеффер, и Бернхард Holzmann. Это исследование было поддержано Deutsche Forschungsgemeinschaft, Бонне-Бад Годесберг, Германия (ГРК-840; Vo 450/10-1).

1. Подготовка мышь <ol><li> Анестезию мыши, внутрибрюшинного введения наркотических жидкости (см. таблицу реагентов) и поместить его в лежачем положении. </li><li> Ноги мыши должны быть исправлены с лентой на пластине для обеспечения устойчивого положения животного во время операции. </li></ol> 2. Операция <ol><li> Возьмите IV канюли, которая обычно используется для IV инъекции в организме человека, и вырезать его пластиковой трубки циркулярно 2 мм от его кончика. Мы используем три различных размеров канюль контролировать уровень смертности (BD Venflon 18GA (1,2 x45mm, 80 мл / мин); 16GA (1,7 x45mm, 180 мл / мин) 14GA (2,0 x45mm, 270 мл / мин)). </li><li> После тщательной дезинфекции кожи живота, надрезать ее вдоль его средней линии около 15 мм. Открытое перитонеального пещере на надрезание мышцы живота и брюшину вдоль белой линии. </li><li> Определить полюса слепой кишки и вытащить тщательно слепой кишки, подвздошной кишки и восходящей кишки из живота за счет использования ватные тампоны. </li><li> 15 мм дистальнее илеоцекального клапана, нужно проткнуть стену восходящей ободочной кишки с 7 / 0 шва. Таким образом, поражения кишечника суда должны избегать. Шва устанавливается на толстой стене два хирургических узлов. </li><li> Теперь прокол восходящей ободочной кишки с подготовленным канюли 1-2 мм от проксимального 7 / 0 шва. Осторожно вставьте канюлю в толстую кишку, пока борозду в пластиковой трубки находится на одном уровне с серозной. </li><li> Положите свободные концы 7 / 0 шва вокруг канюли и место два раза узел точно в подготовленную борозду из пластиковой трубы. </li><li> Теперь возьмите иглу 7 / 0 шва и стежка через antimesenteric стене толстой кишки. Последовательно, два хирургических узлов должны быть выполнены, чтобы дополнительно зафиксировать пластиковую трубку в толстой стене. Вырезать шов заканчивается. </li><li> Получить железо часть канюли маленькие и вырезать пластиковую трубку с близким (1 мм) для крепления 7 / 0 шва. </li><li> Теперь надо тщательно молока стула от слепой кишки к толстой кишки стента с помощью ватные тампоны, пока небольшая заметка стула появляется на верхней части стента. </li><li> Положить кишки обратно в брюшную пещеру и performe инфузионной терапии путем внутрибрюшинного введения 0,5 мл физиологического раствора. </li><li> Закрыть брюшины с непрерывным швом (4 / 0). </li><li> Закрыть кожи с особыми швов (4 / 0). </li></ol> 3. Ведение послеоперационного периода <ol><li> Положите животное обратно в свою клетку, которая должна содержать достаточное количество пищи и воды. Для обезболивания, внутрибрюшинного введения мощным болеутоляющим веществом (мы используем бупренорфин) должны регулярно выполняться. </li><li> В течение первых двух дней после операции, нужно контролировать животных каждые 6 часов. </li></ol> 4. Шам CASP <ol><li> Выполните шаги 1.1-2.4. </li><li> Не прокол толстой кишки. Просто выполните шаги 2.6-2.8. </li><li> Выполните шаги 2.10-3.2. </li></ol> 5. Каспий <ol><li> Выполните CASP использованием канюли 14G следующие шаги 1.1-3.1 </li><li> 5 часов после CASP, нужно работать животное снова. Подготовка и анестезию мыши опять же согласно шаги 1.1-1.2 </li><li> Открытые швы брюшной стенки. </li><li> Вытяните восходящей ободочной кишки с стента вставлены. </li><li> Аккуратно вырежьте Швы фиксации стента и удаления стента. </li><li> Закрыть дефект в толстой кишке с одним обращением швов (7 / 0). </li><li> Положить кишки обратно в брюшную полость и промойте последнем дважды по 10 мл физиологического раствора. </li><li> Закрыть брюшины с непрерывным швом (4 / 0). </li><li> Закрыть кожи с особыми швов (4 / 0). </li><li> Выполните шаги 3.1-3.2 </li></ol> 6. Представитель Результаты В течение нескольких часов после операции, животных показывают клинические признаки начала сепсиса. Типичными симптомами болезни являются ограниченными физическими возможностями, ощетинившийся пальто, потливость, снижение потребления пищи, потеря веса, а также сократить бегство поведения. Животные развивается тяжелый перитонит с последовательной системной инфекции обычно умирают в течение 48 часов. В зависимости от вставлен стент размера, отличные показатели смертности могут быть получены. 14G стента приводит к 100% смертности, 16G дает 70% смертности и смертности на 50% может быть достигнута с помощью 18G стента (рис. 1а). Операции Шам результаты в выживаемости 100%. Как правило, все животные погибают промежуточные первые 48 часов после CASP. Таким образом, все животные, которые живы в это время точка может рассматриваться как оставшихся в живых. Однако, мы рекомендуем дополнительный период наблюдения, по крайней мере 72 часов, чтобы обнаружить редкие &quot;конце смерти&quot; после CASP. Результаты Каспи зависит от периода времени после CASP, когда стент удаляется. 3ч после вмешательства CASP результаты в выживаемости 45%. Если стент удаляется 5ч после CASP, только 10%животные выживают процедуры. Стента после удаления 9ч приводит смертности на 100% (рис. 1b). Шам Каспи приводит к 100% выживаемости. Для настройки Каспи, мы рекомендуем наблюдения сроком на 10 дней, потому что обычно это животные, которые умирают позднее чем через 48 часа после CASP. Макроскопические осмотр брюшной места нахождения имущества через 24 часа после CASP показаны типичные признаки перитонита: отеки, вазодилатация, эритематозные стену кишки, резкое разграничение Пейеровы бляшки, кишечник паралич, свободной жидкости, и септического секреции (рис. 2). Системная инфекция может проявиться бактериологического анализа. 12 часов после CASP, массивные бактериальные количества могут быть обнаружены в брюшную промывание, крови, печени, легких, селезенки и почек. Качественный анализ показывает, бактерии системной инфекции типичными бактериями кишечника, как E. палочка, бактероиды видов, энтерококков видов и т.д. (рис. 3). CASP вызванной сепсисом проявляется в местных, а также системные выпуск про-и противовоспалительных цитокинов и хемокинов. 12 часов после CASP, значительное количество ФНО, ИЛ-1β, IL-6, IL-10, MCP-1 и другие могут быть измерены с помощью ИФА в крови, но и в супернатантах орган суспензий, например, печени, легких, селезенки, почек (рис. 4). При установлении CASP в вашей лаборатории, выживаемость, бактериологии и цитокина должны быть приняты в качестве контрольных параметров для правильного выполнения CASP. В дальнейшем эти параметры могут быть приняты как стандарт зачитал система для всех экспериментальных установок. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig1.jpg" alt="Рисунок 1" /> На рисунке 1а: Выживание после CASP. Выживаемость следующие CASP операции зависит от диаметра вставлен стент. 14G результаты CASP в смертность на 100%, 16G результаты CASP в 70% смертности и 18G CASP приводит к 50% смертности. Шам CASP связано с выживанию 100%. . п = 20/group B: Выживаемость следующие Каспи операции зависит от времени стента удаления. Стент удаление на 3 часа после 14G CASP приводит к смертности на 55%. Стент удаление на 5 часов после 14G CASP приводит к смертности на 90%, тогда как удаление стента в 9ч после 14G результаты CASP в 100% смертности. Шам Каспи (5 часов) приводит к выживанию 100%. п = 10/group (Шам Каспи, Каспи 9 часов), п = 20/group (3ч Каспи, 5h Каспи). <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig2.jpg" alt="Рисунок 2" /> Рисунок 2: Брюшной 24h места нахождения имущества после CASP. Брюшная стенка была снята 24 часов после 16G CASP или фиктивных CASP, соответственно. Места нахождения имущества из мнимого работать мышь выглядит физиологической. В противоположность этому, CASP приводит отек, гиперемия, dilatated кишечника, и демаркации патчи Пейера демонстрируя серьезный перитонита. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig3.jpg" alt="Рисунок 3" /> Рисунок 3: бактериологии. CASP приводит к тяжелой инфекции из нескольких отсеков и органов по кишке бактерий в пределах 12 часов после операции. Бактериальные номера даются как колониеобразующих единиц (КОЕ) на мл, соответственно. Бактериальные культуры, взятых из мнимого работать мышей полностью стерильными (не показаны). 16G CASP, п = 5/group. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig4.jpg" alt="Рисунок 4" /> Рисунок 4: Цитокины. CASP вызывает системный иммунный ответ в виде нескольких цитокинов и хемокинов обнаруживаются в плазме, а также в орган супернатанты. На рисунке показано, образцово провоспалительных цитокинов, фактор некроза опухоли (ФНО) и интерлейкин-6 (ИЛ-6), а также преимущественно противовоспалительным Ил-10. 12 ч после CASP, замечательные уровни могут быть обнаружены в плазме крови, печени, легких и селезенке. Тем не менее, Ил-10 не могут быть обнаружены в легких и селезенке после CASP. Шам операция не приводит ни к каким секрецию цитокинов (не показаны). 16G CASP, п = 5/group.

<ol>
	<li>Maier, S., Traeger, T., Entleutner, M., Westerholt, A., Kleist, B., Huser, N., Holzmann, B., Stier, A., Pfeffer, K., Heidecke, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cecal+ligation+and+puncture+versus+colon+ascendens+stent+peritonitis:+two+distinct+animal+models+for+polymicrobial+sepsis.">Cecal ligation and puncture versus colon ascendens stent peritonitis: two distinct animal models for polymicrobial sepsis.</a> Shock. 21, 505-511 (2004).</li><li>Bougaki, M., Searles, R. J., Kida, K., Yu, J. D. e., Buys, E. S., Ichinose, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOS3+protects+against+systemic+inflammation+and+myocardial+dysfunction+in+murine+polymicrobial+sepsis.">NOS3 protects against systemic inflammation and myocardial dysfunction in murine polymicrobial sepsis.</a> Shock. , (2009).</li><li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis:+setting+the+stage.">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li><li>Busse, M., Traeger, T., Potschke, C., Billing, A., Dummer, A., Friebe, E., Kiank, C., Grunwald, U., Jack, R. S., Schutt, C., Heidecke, C. D., Maier, S., Broker, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+role+for+CD4++T+lymphocytes+in+murine+diffuse+peritonitis+due+to+inhibition+of+local+bacterial+elimination.">Detrimental role for CD4+ T lymphocytes in murine diffuse peritonitis due to inhibition of local bacterial elimination.</a> Gut. 57, 188-195 (2008).</li><li>Daubeuf, B., Mathison, J., Spiller, S., Hugues, S., Herren, S., Ferlin, W., Kosco-Vilbois, M., Wagner, H., Kirschning, C. J., Ulevitch, R., Elson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TLR4/MD-2+monoclonal+antibody+therapy+affords+protection+in+experimental+models+of+septic+shock.">TLR4/MD-2 monoclonal antibody therapy affords protection in experimental models of septic shock.</a> J Immunol. 179, 6107-6114 (2007).</li><li>Entleutner, M., Traeger, T., Westerholt, A., Holzmann, B., Stier, A., Pfeffer, K., Maier, S., Heidecke, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+interleukin-12,+oxidative+burst,+and+iNOS+on+the+survival+of+murine+fecal+peritonitis.">Impact of interleukin-12, oxidative burst, and iNOS on the survival of murine fecal peritonitis.</a> Int J Colorectal Dis. 21, 64-70 (2006).</li><li>Kerschen, E. J., Fernandez, J. A., Cooley, B. C., Yang, X. V., Sood, R., Mosnier, L. O., Castellino, F. J., Mackman, N., Griffin, J. H., Weiler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxemia+and+sepsis+mortality+reduction+by+non-anticoagulant+activated+protein.">Endotoxemia and sepsis mortality reduction by non-anticoagulant activated protein.</a> C. J Exp Med. 204, 2439-2448 (2007).</li><li>Kiank, C., Koerner, P., Kessler, W., Traeger, T., Maier, S., Heidecke, C. D., Schuett, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seasonal+variations+in+inflammatory+responses+to+sepsis+and+stress+in+mice.">Seasonal variations in inflammatory responses to sepsis and stress in mice.</a> Crit Care Med. 35, 2352-2358 (2007).</li><li>Lustig, M. K., Bac, V. H., Pavlovic, D., Maier, S., Grundling, M., Grisk, O., Wendt, M., Heidecke, C. D., Lehmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+ascendens+stent+peritonitis--a+model+of+sepsis+adopted+to+the+rat:+physiological,+microcirculatory+and+laboratory+changes.">Colon ascendens stent peritonitis--a model of sepsis adopted to the rat: physiological, microcirculatory and laboratory changes.</a> Shock. 28, 59-64 (2007).</li><li>Traeger, T., Kessler, W., Assfalg, V., Cziupka, K., Koerner, P., Dassow, C., Breitbach, K., Mikulcak, M., Steinmetz, I., Pfeffer, K., Heidecke, C. D., Maier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+role+of+CC+chemokine+receptor+4+in+murine+polymicrobial+sepsis.">Detrimental role of CC chemokine receptor 4 in murine polymicrobial sepsis.</a> Infect Immun. 76, 5285-5293 (2008).</li><li>Traeger, T., Kessler, W., Hilpert, A., Mikulcak, M., Entleutner, M., Koerner, P., Westerholt, A., Cziupka, K., Rooijen, N. v. a. n., Heidecke, C. D., Maier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+depletion+of+alveolar+macrophages+in+polymicrobial+sepsis+increases+lung+injury,+bacterial+load+and+mortality+but+does+not+affect+cytokine+release.">Selective depletion of alveolar macrophages in polymicrobial sepsis increases lung injury, bacterial load and mortality but does not affect cytokine release.</a> Respiration. 77, 203-213 (2009).</li><li>Traeger, T., Mikulcak, M., Eipel, C., Abshagen, K., Diedrich, S., Heidecke, C. D., Maier, S., Vollmar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kupffer+cell+depletion+reduces+hepatic+inflammation+and+apoptosis+but+decreases+survival+in+abdominal+sepsis.">Kupffer cell depletion reduces hepatic inflammation and apoptosis but decreases survival in abdominal sepsis.</a> Eur J Gastroenterol Hepatol. , (2010).</li><li>Weighardt, H., Kaiser-Moore, S., Schlautkotter, S., Rossmann-Bloeck, T., Schleicher, U., Bogdan, C., Holzmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+I+IFN+modulates+host+defense+and+late+hyperinflammation+in+septic+peritonitis.">Type I IFN modulates host defense and late hyperinflammation in septic peritonitis.</a> J Immunol. 177, 5623-5630 (2006).</li><li>Zantl, N., Uebe, A., Neumann, B., Wagner, H., Siewert, J. R., Holzmann, B., Heidecke, C. D., Pfeffer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+of+gamma+interferon+in+survival+of+colon+ascendens+stent+peritonitis,+a+novel+murine+model+of+abdominal+sepsis.">Essential role of gamma interferon in survival of colon ascendens stent peritonitis, a novel murine model of abdominal sepsis.</a> Infect Immun. 66, 2300-2309 (1998).</li></ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

CASP является полимикробная модель абдоминального сепсиса, которая отвечает большинству критериев постулируется для ценной моделью сепсиса: CASP могут быть выполнены в мелких животных, очень воспроизводимые, легко контролировать по стандартным параметрам, обеспечивает хорошую зачитал возможности, и точно имитирует клиническую настройки абдоминального сепсиса. В сравнительном исследовании мы могли бы показать, что приводит к CASP разлитого перитонита с ранней и неуклонно растет системной инфекции и воспаления (синдром системного воспалительного ответа), тогда как слепой кишки перевязки и пункции (CLP) показывает модель внутрибрюшного абсцесса с устойчивым и незначительных признаков системного воспаления (1). Техника Каспий представляет возможность имитировать клинического течения перитонита с последовательным хирургического санитарии фокус, который является наиболее важным терапевтическим принципом у людей. CASP может быть применен для всех вопросов вокруг сепсис или перитонит и поэтому полезен для всех дисциплин дело с сепсисом исследований, например, иммунологии, фармакологии, хирургии, интенсивной терапии и т.д. подборку публикаций по различным предметам сепсиса использованием CASP модель приводится ниже (1-14). При запуске с CASP, следует иметь в виду, что некоторые практики необходимо, чтобы выполнить операцию точно и быстро. Хирургический опыт может быть полезным, но не требуется. Мы рекомендуем обнаружения letality в качестве параметра для правильного выполнения CASP. Надо начать с 14G CASP как большой стент легче, чем более тонкой. Обученный хирург CASP может работать одна мышь в течение 10 минут. Перед началом любых экспериментов, вы должны убедиться, что вы находитесь рядом с этого периода. Когда вы получили некоторый опыт работы с хирургической процедуры, вы должны проводить выживания кинетической и проверить свои навыки. 14G CASP должны привести к 100% летальности. Новичков в нашей лаборатории, чтобы доказать, что они способны генерировать 100% летальности с 14G CASP, прежде чем начать с экспериментов. Кроме того, бактериологии и цитокинов измерения должны быть выполнены, чтобы проверить сепсиса. Если у вас есть проблемы, начиная с микрохирургической шаги CASP, использование лупы или операционного микроскопа может быть полезным. Но в принципе, CASP может быть также выполнена без этих утилит. Для воспроизводства наши цены на выживание, это абсолютно необходимо, чтобы те же самые материалы, особенно стентов (BD Venflon, см. ниже), которые используются. В противном случае существенного изменения результатов возможно. Кроме того, мы предполагаем, что могут быть изменения в зависимости от результатов, например, индивидуальность хирурга. Тем не менее, влияние таких факторов, как, что должно быть мало. Таким образом, CASP является практически возможно, простой, воспроизводимой и ценные сепсис модель, которая имитирует тесно клинической ситуации абдоминального сепсиса. Именно поэтому подходит для всех областей сепсис исследований.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Narcotic fluid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mix 0.5 mL Rompun with 4.0 mL Ketanest, and add 5.5 mL of saline solution (0.9%). 
For complete anesthesia, inject intraperitoneally 10 &mu;L/g body weight</td>
</tr>
<tr>
<td>Rompun (20 mg/ml Xylazine)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bayer AG 51368 Leverkusen, Germany</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ketanest (25mg/ml Esketamine)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pfizer Pharma GmbH, 10785 Berlin, Germany</td>
<td>647028001E</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Venflon 18GA (1,2x45mm, 80ml/min)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ USA 07417</td>
<td>391457</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Venflon 16GA (1,7x45mm, 180ml/min)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ USA 07417</td>
<td>391455</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Venflon 14GA (2,0x45mm, 270ml/min)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ USA 07417</td>
<td>391456</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Catgut Polyester 4/0 white, non absorbable</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Catgut GmbH, 08258 Markneukirchen, Germany</td>
<td>17218113</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mariderm black 7/0, non absorbable</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Catgut GmbH, 08258 Markneukirchen, Germany</td>
<td>18104900</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

colon ascendens stent peritonitis (casp) - a standardized model for polymicrobial abdominal sepsis

Сепсис остается постоянной проблемой для отделений интенсивной терапии во всем мире. Понимание сложных механизмов сепсиса является предпосылкой для создания новых терапевтических подходов в этой области. Таким образом, животные модели требуются, которые способны точно имитировать человеческие болезни, а также достаточно иметь дело с научными вопросами. Колон Ascendens Стент Перитонит (CASP) является весьма стандартизированной модели для полимикробная абдоминального сепсиса у грызунов. В этой модели небольшое стент хирургически вставляются в восходящей ободочной кишки мышей или крыс приводит к непрерывной утечке кишечных бактерий в брюшную полость. Эта процедура приводит к перитониту, системной бактериемии, орган инфекции кишечника бактерий, и системные, но и местное высвобождение несколько про-и противовоспалительных цитокинов. Летальность CASP можно управлять с помощью диаметр вставлен стент. Вариант этой модели, так называемые CASP с вмешательством (Каспий), повышает возможность удалить септического очага на вторую операцию в соответствии с общими процедурами в клинической практике. CASP это легко можно научиться и высокой воспроизводимостью модель, которая точно имитирует клинического течения абдоминального сепсиса. Это приводит способ учиться на вопросы в нескольких научных областях, например, иммунологии, инфектологии, или хирургического вмешательства.

Watch this Scientific Journal Video about Colon Ascendens Stent Peritonitis CASP - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis at JoVE.com

Colon Ascendens Stent Peritonitis CASP - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

Колон Ascendens Стент Перитонит (CASP) является весьма стандартизированной модели для полимикробная абдоминального сепсиса у грызунов. В этой статье описывается хирургическая процедура CASP. Модель CASP и его варианты позволяют систематическое исследование различных проблем, связанных с предметом сепсиса.

Колон Ascendens Стент Перитонит (CASP) - стандартизированные модели для полимикробная абдоминального сепсиса

Sepsis remains a persistent problem on intensive care units all over the world. Understanding the complex mechanisms of sepsis is the precondition for ...

colon-ascendens-stent-peritonitis-casp-standardized-model-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Colon Ascendens Stent Peritonitis (CASP) - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

19.4K Views.  University of Greifswald. Колон Ascendens Стент Перитонит (CASP) является весьма стандартизированной модели для полимикробная абдоминального сепсиса у грызунов. В этой статье описывается хирургическая процедура CASP. Модель CASP и его варианты позволяют систематическое исследование различны?...

Video: Colon Ascendens Stent Peritonitis CASP - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

Cecal Ligation and Puncture-induced Sepsis as a Model To Study Autophagy in Mice

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is provided to induce sepsis of varying severity in mice using the CLP technique. Autophagy is a fundamental tissue response to stress and pathogen invasion. Two current protocols to assess autophagy in vivo in the context of experimental sepsis are also presented here. (I) Transgenic mice expressing green fluorescence protein (GFP)-LC3 fusion protein are subjected to CLP. Localized enhancement of GFP signal (puncta), as assayed either by immunohistochemical or confocal assays, can be used to detect enhanced autophagosome formation and, thus, altered activation of the autophagy pathway. (II) Enhanced autophagic vacuole (autophagosome) formation per unit tissue area (as a marker of autophagy stimulation) can be quantified using electron microscopy. The study of autophagic responses to sepsis is a critical component of understanding the mechanisms by which tissues respond to infection. Research findings in this area may ultimately contribute towards understanding the pathogenesis of sepsis, which represents a major problem in critical care medicine.

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method. Current protocols to assess autophagy in vivo in the context of CLP-induced sepsis are presented here: A protocol for measuring autophagy using (GFP)-LC3 mice, and a protocol for measuring autophagosome formation by electron microscopy.

Слепой кишки Лигирование и прокол, вызванной Сепсис как модель для изучения аутофагии у мышей

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is ...

A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse polymicrobial sepsis can be induced by injecting cecal slurry intraperitoneally into day of life 7 mice and monitoring them for the following week. Presented here are the detailed steps necessary for the implementation of this neonatal sepsis model. This includes making a homogeneous cecal slurry stock, diluting it to a weight- and litter-adjusted dose, an outline of the monitoring schedule, and a definition of observed health categories used to define humane endpoints. The generation of a homogeneous cecal slurry stock from pooled donors allows for the administration into many litters over time, reducing the variation between donors, and preventing the use of potentially toxic glycerol. The monitoring strategy used allows for the anticipation of survival outcome and the identification of mice that would later progress to death, allowing for an earlier identification of the humane endpoint. Two main behavioral features are used to define the health scores, namely, the ability of the neonatal mice to right themselves when placed on their back and their level of mobility. These criteria could potentially be applied to address humane endpoints in other studies of neonatal disease in mice, as long as a pilot study is performed to confirm accuracy. In conclusion, this approach provides a standardized method to model newborn sepsis in mice, while providing resources to assess animal welfare used to define early humane endpoints for challenged animals.

This protocol provides the necessary steps to establish and evaluate neonatal sepsis in 7-day-old mice.

Контролируемые мыши модель для неонатального сепсиса полимикробная

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse ...

Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple organs. With the development of therapies, most patients survive the hyperinflammatory phase but progress to an immunosuppressive phase, which increases the emergence of secondary infections. Therefore, improved understanding of the pathogenesis underlying secondary hospital-acquired infections in the immunosuppressive phase during sepsis is of tremendous importance. Reported here is a model to test infectious outcomes by creating double-hit infections in mice. A standard surgical procedure is used to induce polymicrobial peritonitis by cecal ligation and puncture (CLP) and followed by intranasal infection of Staphylococcus aureus to simulate pneumonia occurring in immune suppression that is frequently seen in septic patients. This dual model can reflect the immunosuppressive state occurring in patients with protracted sepsis and susceptibility to secondary infection from nosocomial pneumonia. Hence, this model provides a simple experimental approach to investigate the pathophysiology of sepsis-induced secondary bacterial pneumonia, which may be used for discovering novel treatments for sepsis and its complications.

This protocol describes techniques to measure infectious outcomes underlying secondary hospital-acquired infections in the immunosuppressive condition, first by establishing cecal ligation/puncture mice then challenging them with intranasal infection to create a clinically relevant model of immunosuppression sepsis.

Дизайн Цекал Лигация и прокол и интраназальные инфекции Двойная модель сепсиса индуцированной иммуносупрессии

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple ...

Measurement of Pulse Propagation Velocity, Distensibility and Strain in an Abdominal Aortic Aneurysm Mouse Model

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is defined as a localized dilation of the abdominal aorta that exceeds the maximal intraluminal diameter (MILD) by 1.5 times of its original size. Clinical and experimental studies have shown that small aneurysms may rupture, while a subpopulation of large aneurysms may remain stable. Thus, in addition to the measurement of intraluminal diameter of the aorta, knowledge of structural traits of the vessel wall may provide important information to assess the stability of the AAA. Aortic stiffening has recently emerged as a reliable tool to determine early changes in the vascular wall. Pulse propagation velocity (PPV) along with the distensibility and radial strain are highly useful ultrasound-based methods relevant for assessing aortic stiffness. The primary purpose of this protocol is to provide a comprehensive technique for the use of ultrasound imaging system to acquire images and analyze the structural and functional properties of the aorta as determined by MILD, PPV, distensibility and radial strain.

This manuscript describes a detailed protocol for using high frequency ultrasound imaging to measure luminal diameter, pulse propagation velocity, distensibility and radial strain on a mouse model of abdominal aortic aneurysm.

Измерение скорости распространения импульса, неурядицы и деформации в абдоминальной аневризмы мыши модели

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is defined as a localized dilation of the abdominal aorta that exceeds the maximal intraluminal diameter (MILD) by 1.5 ...

A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a protocol for studying the pathogenesis of E. coli O1:K1:H7, a serotype responsible for high mortality rates in neonates. Our method utilizes intravital imaging of neonatal pups at different time points during the progression of infection. This imaging, paralleled by measurement of bacteria in the blood, inflammatory profiling, and tissue histopathology, signifies a rigorous approach to understanding infection dynamics during sepsis. In the current report, we model two infectious inoculums for comparison of bacterial burdens and severity of disease. We find that subscapular infection leads to disseminated infection by 10 h post-infection. By 24 h, infection of luminescent E. coli was abundant in the blood, lungs, and other peripheral tissues. Expression of inflammatory cytokines in the lungs is significant at 24 h, and this is followed by cellular infiltration and evidence of tissue damage that increases with infectious dose. Intravital imaging does have some limitations. This includes a luminescent signal threshold and some complications that can arise with neonates during anesthesia. Despite some limitations, we find that our infection model offers an insight for understanding longitudinal infection dynamics during neonatal murine sepsis, that has not been thoroughly examined to date. We expect this model can also be adapted to study other critical bacterial infections during early life.

Infection of neonatal mice with bioluminescent E. coli O1:K1:H7 results in a septic infection with significant pulmonary inflammation and lung pathology. Here, we describe procedures to model and further study neonatal sepsis using longitudinal intravital imaging in parallel with enumeration of systemic bacterial burdens, inflammatory profiling, and lung histopathology.

Неонатальная модель визуализации грамотрицательных бактериальных сепсисов

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a ...

Isolation of Adipogenic and Fibro-Inflammatory Stromal Cell Subpopulations from Murine Intra-Abdominal Adipose Depots

The stromal-vascular fraction (SVF) of white adipose tissue (WAT) is remarkably heterogeneous and consists of numerous cell types that contribute functionally to the expansion and remodeling of WAT in adulthood. A tremendous barrier to studying the implications of this cellular heterogeneity is the inability to readily isolate functionally distinct cell subpopulations from WAT SVF for in vitro and in vivo analyses. Single-cell sequencing technology has recently identified functionally distinct fibro-inflammatory and adipogenic PDGFR&#946;+ perivascular cell subpopulations in intra-abdominal WAT depots of adult mice. Fibro-inflammatory progenitors (termed, &#8220;FIPs&#8221;) are non-adipogenic collagen producing cells that can exert a pro-inflammatory phenotype. PDGFR&#946;+ adipocyte precursor cells (APCs) are highly adipogenic both in vitro and in vivo upon cell transplantation. Here, we describe multiple methods for the isolation of these stromal cell subpopulations from murine intra-abdominal WAT depots. FIPs and APCs can be isolated by fluorescence-activated cell sorting (FACS) or by taking advantage of biotinylated antibody-based immunomagnetic bead technology. Isolated cells can be used for molecular and functional analysis. Studying the functional properties of stromal cell subpopulation in isolation will expand our current knowledge of adipose tissue remodeling under physiological or pathological conditions on the cellular level.

This protocol describes the technical approach to isolate adipogenic and fibro-inflammatory stromal cell subpopulations from murine intra-abdominal white adipose tissue (WAT) depots by fluorescence-activated cell sorting or immunomagnetic bead separation.

Выделение субпопуляций адипогенных и фибровоспалительных стромальных клеток из внутрибрюшных жировых депо мышей

The stromal-vascular fraction (SVF) of white adipose tissue (WAT) is remarkably heterogeneous and consists of numerous cell types that contribute ...

A Contemporary Warming/Restraining Device for Efficient Tail Vein Injections in a Murine Fungal Sepsis Model

In rodent models, tail vein injections are important methods for intravenous administration of experimental agents. Tail vein injections typically involve warming of the animal to promote vasodilation, which aids in both the identification of the blood vessels and positioning of the needle into the vessel lumen while securely restraining the animal. Although tail vein injections are common procedures in many protocols and are not considered highly technical if performed correctly, accurate and consistent injections are crucial to obtain reproducible results and minimize variability. Conventional methods for inducing vasodilation prior to tail vein injections generally depend on the use of a heat source such as a heat lamp, electrical/rechargeable heat pads, or pre-heated water at 37 &#176;C. Despite being readily accessible in a standard laboratory setting, these tools evidently suffer from poor/limited thermo-regulatory capacity. Similarly, although various forms of restraining devices are commercially available, they must be used carefully to avoid trauma to the animals. These limitations of the current methods create unnecessary variables in experiments or result in varying outcomes between experiments and/or laboratories.
In this article, we demonstrate an improved protocol using an innovative device that combines an independent, thermally regulated, warming device with an adjustable restraining unit into one system for efficient streamlined tail vein injection. The example we use is an intravenous model of fungal bloodstream infection that results in sepsis. The warming apparatus consists of a heat-reflective acrylic box installed with an adjustable automatic thermostat to maintain the internal temperature at a pre-set threshold. Likewise, the width and height of the cone restraining apparatus can be adjusted to safely accommodate various rodent sizes. With the advanced and versatile features of the device, the technique shown here could become a useful tool across a range of research areas involving rodent models that employ tail vein injections.

Here, we present an effective and efficient method for rodent tail vein injections using a uniquely designed warming/restraining device. By streamlining the initiation of vasodilation and restraining processes, this protocol allows accurate and timely intravenous injections of large groups of animals with minimal distress.

Современное согревающее/удерживающее устройство для эффективных инъекций хвостовых вен в модели грибкового сепсиса мышей

In rodent models, tail vein injections are important methods for intravenous administration of experimental agents. Tail vein injections typically involve ...

Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water while preventing passage of luminal bacteria and exogenous substances. A breach of this layer results in increased permeability to luminal contents and recruitment of immune cells, both of which are hallmarks of pathologic states in the gut including inflammatory bowel disease (IBD). 
Mechanisms regulating epithelial barrier function and transepithelial migration (TEpM) of polymorphonuclear neutrophils (PMN) are incompletely understood due to the lack of experimental in vivo methods allowing quantitative analyses. Here, we describe a robust murine experimental model that employs an exteriorized intestinal segment of either ileum or proximal colon. The exteriorized intestinal loop (iLoop) is fully vascularized and offers physiological advantages over ex vivo chamber-based approaches commonly used to study permeability and PMN migration across epithelial cell monolayers.
We demonstrate two applications of this model in detail: (1) quantitative measurement of intestinal permeability through detection of fluorescence-labeled dextrans in serum after intraluminal injection, (2) quantitative assessment of migrated PMN across the intestinal epithelium into the gut lumen after intraluminal introduction of chemoattractants. We demonstrate feasibility of this model and provide results utilizing the iLoop in mice lacking the epithelial tight junction-associated protein JAM-A compared to controls. JAM-A has been shown to regulate epithelial barrier function as well as PMN TEpM during inflammatory responses. Our results using the iLoop confirm previous studies and highlight the importance of JAM-A in regulation of intestinal permeability and PMN TEpM in vivo during homeostasis and disease. 
The iLoop model provides a highly standardized method for reproducible in vivo studies of intestinal homeostasis and inflammation and will significantly enhance understanding of intestinal barrier function and mucosal inflammation in diseases such as IBD.

Dysregulated intestinal epithelial barrier function and immune responses are hallmarks of inflammatory bowel disease that remain poorly investigated due to a lack of physiological models. Here, we describe a mouse intestinal loop model that employs a well-vascularized and exteriorized bowel segment to study mucosal permeability and leukocyte recruitment in vivo.

Функциональная оценка кишечной проницаемости и трансэпителиальной миграции нейтрофилов у мышей с использованием стандартизированной модели кишечной петли

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water ...

Characterizing Salmonella Typhimurium-induced Septic Peritonitis in Mice

Sepsis is a dysregulated host immune response to microbial invasion or tissue damage, leading to organ injury at a site distant from that of the infection or damage. Currently, the widely used mice models of sepsis include lipopolysaccharide (LPS)-induced endotoxemia, cecal ligation and puncture (CLP), and monobacterial infection model systems. This protocol describes a method to study the host responses during Salmonella Typhimurium infection-induced septic peritonitis in mice. S. Typhimurium, a Gram-negative intracellular pathogen, causes typhoid-like disease in mice.
This protocol elaborates the culture preparation, induction of septic peritonitis in mice through intraperitoneal injection, and methods to study systemic host responses. Furthermore, the assessment of bacterial burden in different organs and the flow cytometric analysis of increased neutrophil numbers in the peritoneal lavage is presented. Salmonella Typhimurium-induced sepsis in mice leads to an increase in proinflammatory cytokines and rapid infiltration of neutrophils in the peritoneal cavity, leading to lower survival.
Every step in this protocol has been optimized, resulting in high reproducibility of the pathogenesis of septic peritonitis. This model is useful for studying immunological responses during bacterial sepsis, the roles of different genes in disease progression, and the effects of drugs to attenuate sepsis.

Characterizing Salmonella Typhimurium-induced Septic Peritonitis in Mice

This protocol describes the induction of Gram-negative monobacterial sepsis in a mouse model system. The model is useful in investigating the inflammatory and lethal host responses during sepsis.

Характеристика сальмонеллы Typhimurium-индуцированного септического перитонита у мышей

Sepsis is a dysregulated host immune response to microbial invasion or tissue damage, leading to organ injury at a site distant from that of the infection ...

Evaluation of a Reliable Biomarker in a Cecal Ligation and Puncture-Induced Mouse Model of Sepsis

Sepsis is a severe life-threatening and rapidly developing disease that causes millions of deaths annually worldwide. Researchers have made tremendous efforts to elucidate the pathophysiology of sepsis using various animal models; the mouse model of sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP) is widely used in laboratories. The three technical aspects that affect the severity and replicability of the CLP model are the percentage of cecum ligated, the size of the needle used for cecal puncture, and the volume of feces squeezed into the abdominal cavity. The rapid and specific diagnosis of sepsis is a crucial factor that affects the outcome. The gold standard for sepsis diagnosis is microbial culture; however, this process is time-consuming and sometimes inaccurate. The detection of sepsis-specific biomarkers is fast, but the existing biomarkers are unsatisfactory due to a short half-life, non-specificity, and insufficient sensitivity. Therefore, there is an urgent need for a reliable biomarker of sepsis in the early stages. Previous publications suggest that excessive neutrophil extracellular traps (NETs) occur in sepsis. Citrullinated histone H3 (CitH3), as a NET component, is elevated both in septic animals and patients, and the presence of CitH3 is a reliable diagnostic biomarker of sepsis. The present study aimed to describe a standardized mouse model of CLP-induced sepsis and establish a reliable blood biomarker of sepsis. Our work may contribute to the early and accurate diagnosis of sepsis in the future.

This protocol presents the operative details of cecal ligation and puncture (CLP) in a mouse model of sepsis. CLP is one of the most widely used techniques to create an animal model of sepsis. Therefore, a standardized CLP protocol is required for the attainment of reliable research results.

Оценка надежного биомаркера в мышиной модели сепсиса, вызванной перевязкой и пункцией,

Sepsis is a severe life-threatening and rapidly developing disease that causes millions of deaths annually worldwide. Researchers have made tremendous ...

Колон Ascendens Стент Перитонит (CASP) - стандартизированные модели для полимикробная абдоминального сепсиса

Резюме

Смотреть дополнительные видео

PLAYLIST