Таким образом, трудно разделить роль гормональных влияний матки и яичников на установление беременности, поскольку они тесно связаны. Таким образом, этот протокол позволяет нам непосредственно исследовать вклад матки. Хотя некоторые из этих методов, такие как овариэктомия, довольно инвазивны, их относительно легко выполнять после практики и обучения, что делает их подходящими для исследователей, которые плохо знакомы с моделями мышей.
Таким образом, этот метод может быть использован для понимания более широкой регуляции оси HPG, поскольку и яичники, и матка играют важную роль в регуляции этой оси. Если вы никогда раньше не выполняли эти методы, проконсультируйтесь с ветеринарной командой вашего института для обучения и поддержки. Для начала обильно нанесите смазку для глаз на мышь, находящуюся под наркозом, аккуратно нанеся ее на глаз после бритья небольшого участка вмятины ниже позвоночника.
Ввести 0,1 миллилитра карпрофена подкожно в загривок. Проверьте, находится ли животное под наркозом, ущипнув его за задний палец ноги и проверив рефлекс. Затем нанесите бетадин на место операции.
Затем накройте его хирургической драпировкой. С помощью крысиных щипцов оттяните кожу горбинкой вверх и сделайте пятимиллиметровый продольный разрез. Затем, используя тупые щипцы, рассеките кожу от нижележащего мышечного слоя вниз в одну сторону к почкам.
Определите почку, яичник и жировой подушку яичников через мышечную стенку. Захватите и поднимите мышечный слой щипцами. Затем с помощью ножниц сделайте разрез длиной от 0,5 до одного сантиметра и протяните подушечку яичника через разрез с помощью тупых щипцов.
Затем с помощью изогнутого иглодержателя зажмите под яичник и яйцевод на дистальном конце рога матки и иссеките яичник ножницами. Через 30 секунд снимите зажим и промокните стерильной марлей. Чтобы закрыть разрез мышечной стенки, приподнимите верхнюю часть разреза с помощью щипцов.
Затем перевяжите разрез узлом хирурга с помощью шелковых швов. Местно нанесите несколько капель бупивакаина с помощью шприца объемом один миллилитр без прикрепления иглы, а излишки промокните стерильной марлей. После аналогичного выполнения овариэктомии с другой стороны закройте разрез кожи, прижав две стороны кожи вместе и применив пару семимиллиметровых хирургических зажимов, оставляя место для отека раны.
Поместите все необходимое оборудование на фольгу внутри ламинарного потока или капюшона биобезопасности класса II и стерилизуйте УФ-излучением в течение 20 минут. Промойте силастическую трубку в 100% дезиноле и дайте ей высохнуть на воздухе внутри колпака. После высыхания разрежьте трубку на сегменты длиной один сантиметр с помощью скальпеля.
Далее выдавите примерно 200 микролитров герметика в шприц без поршня. Установите на место поршень и выдавите небольшое количество герметика. Нанесите герметик на один конец трубки, разглаживая его пальцем в перчатке.
И дайте герметику высохнуть в течение ночи или под ультрафиолетовым светом в течение 30 минут в вытяжке. Далее насыпьте порошок прогестерона в стерилизованную чашку Петри. Зачерпните порошок в гранулы с помощью щипцов.
Постучите запечатанным концом гранулы по поверхности капюшона, чтобы порошок конденсировался. Затем заклейте открытый конец герметиком. Заверните чашку Петри, содержащую гранулы, в фольгу, чтобы защитить их от света.
Примерно за 72 часа до подкожного введения активируйте гранулы, инкубируя их в ФКС, очищенной древесным углем. Эту процедуру продемонстрирует доктор Фиона Казинс, начинающий научный сотрудник Гудзоновского института медицинских исследований. После гормонального праймирования животных подкожными инъекциями эстрадиола заправьте животных подкожными гранулами прогестерона за два дня до искусственной децидуализации.
Перед операцией обезболите мышь и проверьте глубину анестезии, проверив рефлекс защемления пальцев ног. Затем поместите мышь в положение лежа, поднимите ее хвост и медленно вставьте шестимиллиметровое зеркало во влагалище. Поместите нижнюю часть тела мыши между первыми двумя пальцами недоминантной руки.
Затем, используя указательный палец, осторожно поднимите хвост вверх, чтобы обеспечить лучшую доступность влагалища. Перенесите 20 микролитров кунжутного масла в нехирургический наконечник для переноса эмбрионов и вставьте наконечник через влагалище и шейку матки в рог матки. Медленно вытесните масло.
После этого извлеките зеркало из влагалища. В этом исследовании 80% мышей подверглись успешной децидуализации, а 20% - нет. Поэтому важно, чтобы все ваше хирургическое оборудование и рабочие зоны были стерильными и пациентами при введении устройства НПВП через шейку матки в рог матки мыши.
После индуцирования искусственной децидуализации прогестероновое небо может быть удалено, чтобы имитировать менструацию и изучить распад эндометрия. Используя этот метод, мы можем изучать биологию и регуляцию матки независимо от влияния яичников. Это действительно интересно в области фертильности и женского здоровья в целом.
