Возьмите ткань, обработанную наночастицами, и разрежьте ее на квадратные образцы размером 50 на 50 миллиметров. Подготовьте ночные культуры интересующих микробов, инокулируя изолированные колонии из пластин чистоты в стерильный соевый бульон Trypticase. Инкубировать при температуре 35 градусов Цельсия от 18 до 24 часов.
Разбавляют ночные культуры до 150 миллионов КОЕ на миллилитр или соответствует мутности 0,5 стандарта Макфарланда. Затем, чтобы определить подходящий объем культур для пикирования, добавьте серию объемов разбавленной бульонной культуры на образцы ткани и выберите объем таким образом, чтобы образец ткани полностью поглощал воду и не оставлял остаточной или свободной жидкости. Нанесите объем каждой культуры на образцы, помещенные в стерильные пластины Петри.
Точно так же выполните отрицательный контроль с одним и тем же типом образцов необработанной ткани для каждого соответствующего теста. Чтобы восстановить микробы с помощью жизнеспособных пластин, высушите на воздухе инокулированные образцы внутри пластин Петри при комнатной температуре в течение необходимых периодов контакта, которые необходимо протестировать. Перенесите образцы асептически, чтобы отделить стерильные центрифужные пробирки и плотно закрутить крышки.
Добавьте бульон Letheen или любые соответствующие нейтрализующие буферы, чтобы получить разведение 1:100. После закрытия центрифужных пробирок вихревите в течение одной минуты со средней скоростью. Последовательно разбавляют суспензию стерильным PBS в последующих разведениях 1:10, так что количество колоний в необработанной группе становится слишком низким для подсчета.
Сажайте разведения на соответствующие пластины среды, которые поддерживают рост микроорганизмов, или любые среды, которые оптимизируют рост и обеспечивают хороший контраст, чтобы сделать подсчет колоний точным. Инкубируйте бактериальные пластины при 35 градусах Цельсия в течение двух дней, а грибковые пластины при комнатной температуре в течение пяти дней. Подсчитайте жизнеспособные колониеобразующие единицы непосредственно с помощью счетчика колоний или программного обеспечения для визуализации.
Рассчитайте микробное логарифмическое снижение R из-за антимикробной ткани, используя уравнение, показанное на экране. Здесь A — логарифмическое значение количества колониеобразующих единиц, извлеченных из необработанной ткани, а B — то же самое для обработанной ткани. Здесь показаны результаты логарифмического снижения антимикробной ткани, покрытой наночастицами хитозана, инкапсулированными в тимол, протестированными против S.aureus на кровяном агаре, E.coli на пурпурном лактозном агаре, P.aeruginosa на цетримидном агаре и C. albicans на агаре с декстрозой Сабуро.
Патогенные микроорганизмы наносили на необработанные и обработанные образцы в течение 30 минут и восстанавливали после нейтрализации и разбавления. Коэффициенты разбавления показаны между обработанной и необработанной сериями. Показано логарифмическое уменьшение трех бактерий и одного грибка из-за контакта антимикробных тканей, пропитанных двумя биологически активными соединениями.
Антимикробная эффективность ослабевает после циклов стирки тканей с карвакролом и тимоловым покрытием.
