Detta protokoll är ett utdrag från Singaravelu et al, <a href="https://www.jove.com/video/2336/isolation-and-in-vitro-activation-of-caenorhabditis-elegans-sperm">Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm</a>, J. Vis. Exp. (2011).

1. Berikning av manlig befolkning
<ol><li>Beroende på det experimentella behovet kan ett stort antal män erhållas genom att använda en av följande strategier:<ol>
<li>stor population av vilda hanar kan erhållas genom att korsa 5 vilda hanar och 1 hermafrodit på en liten gräsmatta av OP50 sådd i mitten av NGM-plattan. Ungefär 50% av den efterföljande generationen kommer att vara vilda män.</li>
		<li>
him-5(e1490) eller honom-8(e1489) hermafroditer kastar ett stort antal män. han-5 och honom-8 män är bördiga och det finns ingen uppenbar defekt i spermier morfologi och funktion. Så, han-5 eller honom-8 män kan användas i stället för vilda typ män för många experiment.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Identifiering och isolering av män
<ol><li>Undersök maskarnas svansmorfologi; den manliga maskens svans är rundad.</li>
	<li>Välj L4 steg hanar och överför dem till en NGM platta sådd med E. coli OP50 och låt dem växa för en dag eller två. Växande celibat män i avsaknad av hermafroditer förhindrar förlust av spermier och därmed ett stort antal spermatider skulle vara tillgängliga under experimentella förfarandet.</li>
</ol>

enriching for males: maintaining a stock of male c. elegans

Källa: Singaravelu, G., et al. <a href="https://www.jove.com/video/2336/isolation-and-in-vitro-activation-of-caenorhabditis-elegans-sperm">Isolering och in vitro Aktivering av Caenorhabditis elegans Spermier</a>. J. Vis. Exp. (2011).
Nematoder kan lätt förökas i labbet - delvis för att hermafroditer kan reproducera genom självbefruktning.  Genetiska kors och andra experiment kan dock kräva ett stort antal män.  Denna video beskriver en metod för att berika för manliga C. elegans.

Berikande för män: Upprätthålla ett lager av manlig C. elegans

Source: Singaravelu, G., et al. Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm. J. Vis. Exp. (2011).
Nematodes can be propagated easily ...

- C. elegans occur in two sexes: hermaphrodites, which have two X chromosomes, and males, which have only one X chromosome referred to as XO or X null. Hermaphrodites produce both oocytes and sperm and can reproduce by self- fertilization. Nearly all of their gametes carry an X chromosome, so offspring that result from self- fertilization are mostly hermaphrodites. Rarely, the X chromosome is lost during gametogenesis, resulting in male offspring only about 0.1 to 0.2% of the time. This is not a practical way to collect enough males for any experiment or genetic cross that we need them for. Instead, we can make a hermaphrodite with a male resulting in about half the offspring being male. When carrying out this genetic cross, be sure to include more males than hermaphrodites to ensure efficient mating. In the following example, we will set up a mating plate and isolate male worms in preparation to collect and study spermatids in vitro. - First, obtain a large number of males by crossing five wildtype males and one hermaphrodite on a small lawn of E. coli OP50 bacteria seeded at the center of a nematode growth medium or NGM plate. Roughly 50% of the next generation will be wildtype males. To collect L4 stage males, examine developmental stage and tail morphology under a dissecting microscope. An L4 stage worm is picked based on tail morphology. A male worm has a rounded tail, while a hermaphrodite has a pointed tail. Using a platinum wire, pick 7 to 10 L4 stage males per experiment and transfer them to NGM plate seeded with OP50 and let them grow for a day or two. Growing celibate males in the absence of hermaphrodites prevents the loss of sperm and thus, a large number of spermatids will be available during the experimental procedure.

enriching-for-males-maintaining-a-stock-of-male-c-elegans

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Caenorhabditis elegans (worm)

Genetics

Enriching for Males: Maintaining a Stock of Male C. elegans

2.9K Views. - C. elegans occur in two sexes: hermaphrodites, which have two X chromosomes, and males, which have only 

Enriching for Males: Maintaining a Stock of Male C. elegans

Källa: Singaravelu, G., et al. <a href="https://www.jove.com/video/2336/isolation-and-in-vitro-activation-of-caenorhabditis-elegans-sperm">Isolering och in vitro Aktivering av Caenorhabditis elegans Spermier</a>. J. Vis. Exp. (2011).
Nematoder kan lätt förökas i labbet - delvis för att hermafroditer kan reproducera genom självbefruktning.  Genetiska kors och andra experiment kan dock kräva ett stort antal män.  Denna video beskriver en metod för att berika för manliga C. elegans.

Berikande för män: Upprätthålla ett lager av manlig C. elegans

In This Article

Overview

Protocol

Explore More Articles