JoVE Logo
Faculty Resource Center

Sign In

Summary

Abstract

Protocol

Discussion

Acknowledgements

Materials

References

Immunology and Infection

المسلكة الفأرية العدوى : نموذج من الحصانة من النوع 2 والتهاب في القناة الهضمية

Published: May 24th, 2011

DOI:

10.3791/2774

1The Biomedical Research Centre, University of British Columbia, 2Department of Pathology and Laboratory Medicine, University of British Columbia
* These authors contributed equally

المسلكة الفأرية العدوى المعوية هو نموذج الحصانة TH2 حيث توليد فئران مقاومة للاستجابة وقائية TH2 والفئران عرضة توليد المرضية TH1 الاستجابة.

المسلكة الفأرية هو الممرض من الفئران الطبيعية والبيولوجية ومستضديا مشابهة نوعا من المسلكة التي تصيب البشر والحيوانات 1. تعطى البيض بالتزقيم المعدية عن طريق الفم ، يفقس في الأمعاء الصغيرة البعيدة ، غزو الخلايا الظهارية في الأمعاء (IECS) التي تبطن الخبايا من الأعور والقولون والداني على نضوج الديدان الإفراج البيض في البيئة 1. هذا النموذج هو أداة قوية لدراسة العوامل التي تحكم CD4 + T تنشيط الخلايا المساعد (ث) ، وكذلك تغييرات في ظهارة الأمعاء. وتتميز الاستجابة المناعية التي تحدث في سلالات مقاومة الفطرية ، مثل C57BL / 6 و BALB / ج ، من خلال الاستقطاب السيتوكينات TH2 (IL - 4 ، IL - 5 و IL - 13) وطرد الديدان بينما TH1 المرتبطة السيتوكينات (IL -12 ، IL - 18 ، IFN - γ) تعزيز الالتهابات المزمنة في عكر عرضة وراثيا / الفئران J 2-6. السيتوكينات TH2 تعزيز التغيرات الفسيولوجية في المكروية المعوية بما في ذلك سرعة دوران IECS ، القدح تمايز الخلايا ، والتوظيف ، والتغيرات في نفاذية الظهارية وسلس تقلص العضلات ، والتي تورطت في طرد الدودة 7-15. نحن هنا بالتفصيل بروتوكولا لنشر المسلكة الفأرية البيض والتي يمكن استخدامها في التجارب اللاحقة. ونحن نقدم أيضا عينة تجريبية الحصاد مع اقتراحات لمرحلة ما بعد الإصابة التحليل. عموما ، سوف توفر للباحثين هذا البروتوكول مع الأدوات الأساسية لتنفيذ ماوس الفأرية المسلكة نموذج العدوى التي يمكن استخدامها لمعالجة المسائل المتعلقة الميل ث في الجهاز الهضمي فضلا عن وظائف المناعة في IECS المستجيب.

1. نشر المسلكة البيض الفأرية

  1. لتوليد دفعات جديدة من بيض الفأرية المسلكة ، 20-30 تصيب الفئران العوز المناعي (مثل NOD.Cg - Prkdc SCID Il2rg tm1Wjl / SzJ (NSG) أو 129S6/SvEvTac-Rag2 tm1Fwa (RAG2 -- / --)) أو الفئران الم?.......

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

تفاصيل هذا البروتوكول معيار جرعة عالية العدوى الحادة الفأرية المسلكة التي يمكن تعديلها على النحو المطلوب من قبل المحقق. على سبيل المثال ، يمكن التضحية وأنسجة الفئران التي تحصد في أيام مختلفة. يمكن أن تقرر أن الفئران قد أنشأت بنجاح كامل عبء دودة يمكن التضحية أنه?.......

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الكندية لأبحاث الصحة (MSH - 95368 ، 89773 وMOP - MOP - 106623 لتشيكوسلوفاكيا) ، والمؤسسة الكندية للإبداع. SCM هو المستفيد من جمعية CIHR / الكندي للزمالة أمراض الجهاز الهضمي ما بعد الدكتوراه. CZ هو محقق CIHR جديد.

....

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

NameCompanyCatalog NumberComments
اسم كاشف شركة فهرس العدد تعليقات
إبر تغذية الحيوان (18 × 1 ½ ") بوبر 7912
منحني سلس الملقط Roboz RS - 5047
DMEM Gibco 11965
NOD.Cg - Prkdc SCID Il2r gtm1Wjl / SzJ (NSG) جاكسون مختبرات 005557 هذه هي الفئران التي استخدمناها ، ومع ذلك ، ينبغي لأي الفئران العوز المناعي أو سلالة معرضة العمل.
RNAlater Qiagen 76104
2 مل أنابيب Axygen MCT - 200 - C
15 مل أنابيب صقر 352096
6 لوحات جيدة صقر 353046
بارافورمالدهيد الإلكترون المجهر العلوم 15710
α - RELMβ الأضداد PeproTech المؤتمر الوطني العراقي 0694270Rb

  1. Cliffe, L. J., Grencis, R. K. The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection. Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).
  2. Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. Cytokine-mediated regulation of chronic intestinal helminth infection. J. Exp. Med. 179, 347-351 (1994).
  3. Bancroft, A. J., Grencis, R. K. Th1 and Th2 cells and immunity to intestinal helminths. Chem. Immunol. 71, 192-208 (1998).
  4. Bancroft, A. J., McKenzie, A. N., Grencis, R. K. A critical role for IL-13 in resistance to intestinal nematode infection. J. Immunol. 160, 3453-3461 (1998).
  5. Helmby, H., Takeda, K., Akira, S., Grencis, R. K. Interleukin (IL)-18 promotes the development of chronic gastrointestinal helminth infection by downregulating IL-13. J. Exp. Med. 194, 355-364 (2001).
  6. Owyang, A. M. Interleukin 25 regulates type 2 cytokine-dependent immunity and limits chronic inflammation in the gastrointestinal tract. J. Exp. Med. 203, 843-849 (2006).
  7. Artis, D. RELMβ/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector molecule in the gastrointestinal tract. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 13596-13600 (2004).
  8. Datta, R. Identification of novel genes in intestinal tissue that are regulated after infection with an intestinal nematode parasite. Infect. Immun. 73, 4025-4033 (2005).
  9. Cliffe, L. J. Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite expulsion. Science. 308, 1463-1465 (2005).
  10. Artis, D. New weapons in the war on worms: identification of putative mechanisms of immune-mediated expulsion of gastrointestinal nematodes. Int. J. Parasitol. 36, 723-733 (2006).
  11. Finkelman, F. D. Cytokine regulation of host defense against parasitic gastrointestinal nematodes: lessons from studies with rodent models. Annu. Rev. Immunol. 15, 505-533 (1997).
  12. Grencis, R. K. Enteric helminth infection: immunopathology and resistance during intestinal nematode infection. Chem. Immunol. 66, 41-61 (1997).
  13. Khan, W. I. Modulation of intestinal muscle contraction by interleukin-9 (IL-9) or IL-9 neutralization: correlation with worm expulsion in murine nematode infections. Infect. Immun. 71, 2430-2438 (2003).
  14. Khan, W. I., Blennerhasset, P., Ma, C., Matthaei, K. I., Collins, S. M. Stat6 dependent goblet cell hyperplasia during intestinal nematode infection. Parasite Immunol. 23, 39-42 (2001).
  15. Akiho, H., Blennerhassett, P., Deng, Y., Collins, S. M. Role of IL-4, IL-13, and STAT6 in inflammation-induced hypercontractility of murine smooth muscle cells. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282, 226-2232 (2002).
  16. Kopper, J. J., Mansfield, L. S. Development of improved methods for delivery of Trichuris muris to the laboratory mouse. Parasitol. Res. 107, 1103-1113 (2010).
  17. Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response. Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).

Tags

51 TH2

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved