Trichuris muris Infektion: Ein Modell des Typ-2-Immunität und Entzündung im Darm

Published: May 24th, 2011

DOI:

10.3791/2774

Frann Antignano^1*, Sarah C. Mullaly^1*, Kyle Burrows¹, Colby Zaph^1,2

¹The Biomedical Research Centre, University of British Columbia, ²Department of Pathology and Laboratory Medicine, University of British Columbia

* These authors contributed equally

Trichuris muris Infektion ist ein Darm-Modell von Th2 Immunität, wo resistente Mäuse generieren eine schützende Th2-Antwort und anfälligen Mäusen erzeugen eine pathologische Th1-Antwort.

Trichuris muris ist eine natürliche Erreger von Mäusen und ist biologisch und antigenetisch ähnlich Spezies Trichuris, dass Mensch und Tier ¹ zu infizieren. Infektiöse Eier durch orale Gabe, schlüpfen in die distalen Dünndarm gegeben sind, dringen in die Darmepithelzellen (IECs), die Linie der Krypten des Blinddarms und proximalen Kolon und bei der Reifung der Würmer Eier Freisetzung in die Umwelt ^1. Dieses Modell ist ein leistungsfähiges Werkzeug, um Faktoren zu prüfen, dass die Kontrolle CD4 ⁺ T-Helferzellen (Th)-Zell-Aktivierung sowie Änderungen im Darmepithel. Die Immunantwort, die in resistenten Inzuchtstämme, wie C57BL / 6 und BALB / c auftritt, wird von Th2 polarisiert Zytokine (IL-4, IL-5 und IL-13) und Vertreibung von Würmern während Th1-assoziierte Zytokine (IL charakterisiert -12, IL-18, IFN-γ) zu fördern chronische Infektionen bei genetisch anfälligen AKR / J-Mäuse ^2-6. Th2-Zytokine fördern physiologische Veränderungen in der Darm-Mikroumgebung einschließlich schnellen Umsatz von IECs, Pokal-Zell-Differenzierung, Rekrutierung und Veränderungen in epithelialen Permeabilität und Kontraktion der glatten Muskulatur, die alle in Wurm Vertreibung ^7-15 verwickelt waren. Hier haben wir ausführlich ein Protokoll für die Verbreitung Trichuris muris Eier, die in nachfolgenden Experimenten verwendet werden können. Wir bieten auch eine Probe experimentelle Ernte mit Vorschlägen für post-Infektion Analyse. Insgesamt wird dieses Protokoll Forscher mit den grundlegenden Tools, um eine Trichuris muris Maus Infektion Modell, das verwendet werden, um Fragen zu Th Neigung in den Magen-Darm-Trakt sowie Immun-Effektor-Funktionen von IECs Adresse kann wahrnehmen können.

1. Propagierung von Trichuris muris Eier

So generieren Sie neue Chargen von Trichuris muris Eier, infizieren 20-30 immundefizienten Mäusen (zB NOD.Cg-Prkdc ^scid IL2RG ^tm1Wjl / SzJ (NSG) oder 129S6/SvEvTac-Rag2 ^tm1Fwa (RAG2 ^{- / -))} oder genetisch anfälligen Mäusen ( zB. AKR / J), die 6-8 Wochen alt, mit ca. 300 Trichuris muris Eier durch orale Gabe sind.
Nach 32-35 Tage opfern die Mäuse durch CO _{2-Erstickung.}

Dieses Protokoll Details einer Standard-Hochdosis akuten Trichuris muris Infektion, die modifiziert, wie von dem Prüfer erforderlich werden kann. Zum Beispiel können Mäuse getötet und sein Gewebe an verschiedenen Tagen geerntet. Um festzustellen, dass die Mäuse erfolgreich voller Wurm Belastung etablierten sie sich am Tag 14 geopfert werden, an welcher Stelle alle Mäuse sollte eine Belastung von etwa 200 Würmer tragen. Mäuse können auch für 32 Tage, wo kein Wurm erkannt Reife erreicht haben und würde.......

Diese Arbeit wurde von den Canadian Institutes of Health Research (MSH-95368, MOP-89773 und MOP-106623 bis CZ) und der Canada Foundation for Innovation unterstützt. SCM ist der Empfänger einer CIHR / Canadian Association of Gastroenterology Postdoc-Stipendium. CZ ist ein CIHR New Investigator.

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Name des Reagenzes	Firma	Katalog-Nummer	Kommentare
Name	Company	Catalog Number	Comments
Tierfütterung Needles (18 x 1 ½ ")	Popper	7912
Glatte gebogenen Pinzette	Roboz	RS-5047
DMEM	Gibco	11965
NOD.Cg-Prkdc ^scid IL2R ^gtm1Wjl / SzJ (NSG)	Jackson Laboratories	005557	Dies sind die Mäuse verwendeten wir jedoch sollte jede immundefizienten Mäusen oder anfälligen Stamm zu arbeiten.
RNAlater	Qiagen	76104
2 ml Röhrchen	Axygen	MCT-200-C
15 ml Röhrchen	Falke	352096
6 Well-Platten	Falke	353046
Paraformaldehyd	Electron Microscopy Wissenschaft	15710
α-Antikörper RELMβ	PeproTech Inc	0694270Rb

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